二甲雙胍對成骨細胞增殖、BMP-2及Cbfal mRNA表達的影響.pdf

1、目的：
　　 初步研究二甲雙胍(metforminMF)在體外對原代乳鼠顱蓋骨成骨細胞增殖、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（bonemorphogeneticprotein-2BMP-2）及核心結合因子(corebindingfacteralCbfal)mRNA的表達，探討二甲雙胍對骨代謝的可能作用機制。
　　 方法：
　　 1、分離培養(yǎng)原代顱蓋骨成骨細胞，觀察成骨細胞的形態(tài)并對其進行鑒定。
　　 2、以乳鼠成骨細胞

2、為體外實驗模型，不同濃度（0、50、100、200、400μmol/l）的二甲雙胍溶液干預體外培養(yǎng)的成骨細胞24小時后，MTT法檢測小鼠顱蓋骨成骨細胞的增殖能力。
　　 3、不同濃度(0、50、100、200、400μmol/l)的二甲雙胍溶液干預體外培養(yǎng)的成骨細胞24小時后，通過實時熒光定量PCR法檢測成骨細胞BMP-2及CbfalmRNA的表達。
　　 4、統(tǒng)計學分析：實驗所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標準差表示，應用SPSS1

3、7.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理分析，各組總體上有無差別采用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD法，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 1、體外培養(yǎng)的乳鼠成骨細胞形狀為梭形、不規(guī)則形、三角形。堿性磷酸酶組織化學染色呈陽性，胞漿呈灰黑色，茜素紅染色（培養(yǎng)液中加入β-甘油磷酸鈉及L-抗壞血酸）呈紅色結節(jié)。
　　 2、不同濃度的二甲雙胍(0、50、100、200、400μmol/l)溶液干預體外培養(yǎng)的原

4、代成骨細胞24小時后，可促進其增殖，OD值顯著增加(P＜0.05)，對照組與實驗組，實驗組組間比較，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 3、不同濃度(0、50、100、200、400μmol/l)的二甲雙胍溶液干預體外培養(yǎng)的成骨細胞24小時后，通過實時熒光定量PCR法檢測成骨細胞BMP-2及CbfalmRNA表達。結果顯示：二甲雙胍促進BMP-2及CbfalmRNA表達，呈劑量效應關系。對照組與實驗組，實驗組組間比較，均有統(tǒng)計學意義。