棉鈴蟲羽化激素cDNA的克隆，表達及功能研究.pdf

1、中國科學技術(shù)大學碩士學位論文棉鈴蟲羽化激素cDNA的克隆，表達及功能研究姓名：章梅申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導教師：徐衛(wèi)華20060501中|玉1刷學拉術(shù)大學lii：lj學位論文作端：章攤專業(yè)：遺傳學摘要羽化激素(Eclosionhomlorte，EH)是一個由62個氨基酸組成的神經(jīng)肽，最早從煙草天蛾(Manducasexta)和家蠶(Bombyxmwi)的頭部分離得到，體外實驗發(fā)現(xiàn)它可以觸發(fā)昆蟲成蟲蛻皮，所以稱為羽化激素。本研究

2、利用RT—PCR翮RACE技術(shù)，克隆了棉鈴蟲(Helicoverpaarmiget。a，Har)的EHcDNA全長序列?？Ｐ蛄芯幋a88個氨基酸的前體蛋白，其中包括26個氨基酸的信號肽和62個氨基酸的成熟肽。同源性分析表明棉鈴蟲EH和其它昆蟲中分離的EH具有很高的保守性。Northern雜交和RTPCR分析都表明EH只在棉鈴蟲的腦中表達，其它神經(jīng)組織和非神經(jīng)組織不表達。RTPCR結(jié)合Southern雜交分析發(fā)現(xiàn)，棉鈴蟲EHmRNA表達呈現(xiàn)

3、規(guī)律性變化，在蛻皮前mRNA表達量上升到最高值，蛻皮后逐漸下降。免疫組化和原位雜交結(jié)果證明，棉鈴蟲羽化激素在mRNA水平和蛋白水平上都定位于棉鈴蟲腦的V型細胞內(nèi)。此外，免疫組化和Western的結(jié)果顯示EH釋放有兩條不同的途徑，即為從棉鈴蟲腦的V型細胞釋放到中樞神經(jīng)節(jié)內(nèi)和釋放到棉鈴蟲血淋巴內(nèi)在外周神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮其功能。利用ELISA分析，發(fā)現(xiàn)在蛻皮整個過程中，血淋巴內(nèi)的EH滴度在蛻皮時達到最高值。這些結(jié)果與EH觸發(fā)蛻皮的功能是一致的。RT