重金屬鉛、汞對(duì)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞生物特性的影響.pdf

1、目的:探討醋酸鉛和甲基汞(methyl mercury,MeHg)對(duì)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HucMSCs)生物學(xué)特性的影響,為鉛對(duì)造血系統(tǒng)影響的研究以及汞生殖發(fā)育毒性機(jī)制的研究提供新的視角,為毒理學(xué)試驗(yàn)在干細(xì)胞水平的研究提供新的思路。
　　 方法:(1)采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞,取第3—5代用于本實(shí)驗(yàn)。(2)運(yùn)用MTT法,細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢

2、測(cè)醋酸鉛對(duì)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響,選取60μmol/L作為后續(xù)試驗(yàn)的作用濃度;流式細(xì)胞儀分析醋酸鉛對(duì)間質(zhì)干細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞周期的影響;成骨誘導(dǎo)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,誘導(dǎo)14天后,進(jìn)行ALP細(xì)胞化學(xué)染色以及鈣基質(zhì)染色(Von Kossa),并提取RNA,RT-PCR檢測(cè)ALP基因水平的差異;60μmol/L醋酸鉛作用24,48,72小時(shí)后RT-PCR檢測(cè)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞因子的表達(dá)情況;用集落形成實(shí)驗(yàn)來(lái)研究醋酸鉛對(duì)間質(zhì)干細(xì)胞造血支持作用的

3、影響。(3)用100ppm的醋酸鉛作用SD大鼠建立鉛中毒模型,取大鼠骨髓切片HE染色,觀察醋酸鉛對(duì)大鼠骨髓的損傷。(4)運(yùn)用MTT法檢測(cè)甲基汞對(duì)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞儀分析不同濃度甲基汞對(duì)間質(zhì)干細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞周期的影響;成骨誘導(dǎo)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,誘導(dǎo)14天后,進(jìn)行ALP細(xì)胞化學(xué)染色以及鈣基質(zhì)染色(Von Kossa),并提取RNA,RT-PCR檢測(cè)ALP基因水平的差異。
　　 結(jié)果:(1)醋酸鉛作用后會(huì)抑制細(xì)胞增

4、殖并呈濃度時(shí)間依賴(lài)性,可以引起細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞的成骨分化,并導(dǎo)致臍帶間質(zhì)干細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力下降,體外造血支持作用受到抑制。(2)1000ppm醋酸鉛作用兩個(gè)或三個(gè)月后,大鼠血鉛水平明顯增高,發(fā)生鉛中毒,大鼠骨髓發(fā)生病理改變。(3)甲基汞作用后導(dǎo)致臍帶間質(zhì)干細(xì)胞增殖能力減低,細(xì)胞發(fā)生凋亡,成骨分化能力受到抑制。
　　 結(jié)論:(1)醋酸鉛可以抑制臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的增殖分化,導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生凋亡,分泌的細(xì)胞因子表達(dá)減低,造血支持作用