苦參堿對涎腺腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞抑制作用的實驗研究.pdf

1、目的：觀察中藥苦參有效成分苦參堿對涎腺腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞生長增殖的抑制作用，初步探討苦參堿對ACC-M細(xì)胞抑制作用的機(jī)制。 方法：ACC-M細(xì)胞由上海第二醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院提供，苦參堿由廣州明興制藥廠生產(chǎn)，ACC-M細(xì)胞培養(yǎng)于普通RPMI-1640培養(yǎng)基中。實驗組用含不同濃度(0.25mg/ml、0.50mg/ml、0.75mg/ml、1.00mg/ml)苦參堿的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，對照組正常培養(yǎng)，到實驗設(shè)計規(guī)定的時間終止培養(yǎng)

2、，進(jìn)行各項指標(biāo)檢測。采用MTT法觀察其生長抑制效應(yīng)；流式細(xì)胞技術(shù)分析細(xì)胞周期變化；RT-PCR法分析苦參堿對ACC-M細(xì)胞hTERT基因表達(dá)抑制效應(yīng)；PV-9000兩步法免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察實驗組與對照組Bcl-2、Bax、PCNA蛋白表達(dá)變化；間接免疫熒光聯(lián)合流式細(xì)胞技術(shù)定量比較Bcl-2、Bax、PCNA實驗組與對照組的表達(dá)。統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS.10.0軟件，采用x2檢驗、方差分析和t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，取α=0.05為顯著性檢驗

3、水準(zhǔn)。 結(jié)論：1.苦參堿能明顯抑制ACC-M細(xì)胞的生長增殖，其抑制效應(yīng)與苦參堿濃度和作用時間成正相關(guān)。2.苦參堿能改變ACC-M細(xì)胞的周期分布，有明顯的G1期阻滯作用。統(tǒng)計學(xué)分析有濃度、時間效應(yīng)。3.苦參堿可調(diào)控ACC-M細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax的表達(dá)，通過改變Bcl-2/Bax的比值誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。4.苦參堿能抑制ACC-M細(xì)胞的端粒酶活性，其抑制機(jī)制是通過下調(diào)hTERT基因表達(dá)起作用。5.細(xì)胞周期阻滯、端粒酶活性抑制