戊四氮誘導發(fā)育鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬內神經發(fā)生的研究.pdf

1、目的:癲癇是腦神經元過度放電而引起的反復發(fā)作性腦功能障礙,其中癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)為一種嚴重的癲癇發(fā)作形式,嚴重影響著兒童發(fā)育和健康。在癲癇患者中約20％-25％的患者即使科學的應用抗癲癇藥物,發(fā)作仍難控制,成為難治性癲癇,因此迫切需要尋求新的有效的治療方法。研究表明神經干細胞(NSCs)移植的研究可為難治性癲癇的治療帶來一線曙光。NSCs增殖、遷移、分化、存活等演化過程是一個神經發(fā)生過程。成年大鼠的癲癇性發(fā)作等可導致NSCs的廣泛增殖

2、,由于發(fā)育鼠與成年鼠存在各方面的差異,用成年鼠的研究資料不能完全解釋發(fā)育鼠的大腦癲癇后的反應機制。因此,本實驗選擇發(fā)育期大鼠觀察SE后海馬齒狀回(dentate gyrus,DG)的神經發(fā)生特點,為神經干細胞移植治療癲癇提供科學的參考依據。
　　 方法:選擇生后7天(P7)、P14、P21、P28四個日齡組SD大鼠,每個日齡組大鼠隨機分為癲癇持續(xù)狀態(tài)組(PTZ組)和正常對照組(NS組),戊四氮點燃SE后,通過免疫組化法觀察發(fā)作后

3、不同時間點的DG區(qū)細胞增殖情況。同時又選擇P14大鼠為研究對象,通過標記5-溴脫氧尿核苷(Brdu)、NeuN、GFAP觀察NSCs分化情況。
　　 結果:1、點燃模型的建立及癲癇持續(xù)狀態(tài)行為觀察:PTZ組大鼠發(fā)作達3.5級以上,持續(xù)1小時,NS組無驚厥。2、NSCs增殖與遷移情況(nestin免疫組化):(1)在各個日齡鼠SE發(fā)作后第1天齒狀回出現nestin陽性細胞,但是增加峰值的低于NS組,SE發(fā)作后第7天nestin陽性

4、細胞逐漸增多,SE發(fā)作后第14天達到峰值,SE發(fā)作后第21天逐漸減少,第28天下降至最低。其中,SE發(fā)作后第7、14天幼鼠齒狀回nestin陽性細胞數明顯高于各自的NS組(P＜0.05),總體表現出先上升后下降的趨勢。在各個日齡的相應正常發(fā)育鼠腦齒狀回中nestin表達隨著日齡的增加而逐漸減少。(2)在SE發(fā)作后同一時間點,齒狀回內NSCs增殖強度具有明顯的年齡相關性。在SE發(fā)作之后第1天nestin陽性細胞數隨著大鼠日齡的增加而逐漸呈

5、下降趨勢,而且P7日齡大鼠與其他三個日齡組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。同樣現象也存在于SE發(fā)作后第7、14、21天三個時間觀察點。而對于正常發(fā)育鼠來說年齡越小nestin表達強度越大,年齡增大nestin表達減弱。(3)在SE發(fā)作后第1天及第7天時大部分nestin陽性細胞分布于顆粒下層,發(fā)作后第14天nestin陽性細胞逐漸向顆粒細胞層遷移,遷移時細胞形態(tài)發(fā)生改變。(4)在SE發(fā)作后第7天-第28天有少部分nestin陽性

6、細胞異位遷移入海馬的門區(qū)和內分子層,異位遷移現象在P14、P21、P28三個日齡組均可觀察到,但在P7日齡組未見。(5)nestin陽性細胞不僅發(fā)現于齒狀回,還存在于海馬CA1、CA3及大腦皮層某些區(qū)域,如頂皮質區(qū)等。而且不同部位的細胞形態(tài)不同。3、NSCs分化情況(Brdu免疫熒光雙標):Brdu陽性細胞大多同時表達成熟神經元的標記物(Noun),很少與星形膠質細胞標記物(GFAP)有共存現象。P14日齡大鼠不管在SE發(fā)作后還是正常發(fā)

7、育中齒狀回Brdu陽性細胞同時表達NeuN的細胞數均在80％以上,兩組比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),同時有4％-5％共表達GFAP,陰性對照組無免疫反應產物。
　　 結論:1、癲癇持續(xù)狀態(tài)可促進發(fā)育鼠海馬DG的神經發(fā)生,而且神經發(fā)生有年齡相關性。2、NSCs增殖需經過數天的潛伏期,在癲癇發(fā)作后14天達高峰,并在3周-4周恢復正常。神經發(fā)生的最初部位在顆粒下層,約1周-2周NSCs遷移到顆粒細胞層,同時也有門區(qū)和內分子層異位遷