妊娠婦女HBV基因型檢測及其與宮內感染的相關性研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學碩士學位論文妊娠婦女HBV基因型檢測及其與宮內感染的相關性研究姓名：宋天蓉申請學位級別：碩士專業(yè)：婦產科學指導教師：鐘梅20050605中文摘要目的：1建立寡核苷酸陣列檢測HBV基因型的方法，探討其可行性。2對各基因型的宮內感染率進行分析，探討HBV宮內感染中是否存在優(yōu)勢基因型。材料與方法：1以HBV前C區(qū)的各型的特異性的區(qū)域及共同區(qū)域做為探針，將修飾后的探針陣列于“活化”的帶負電的尼龍膜上。設計通用引物并在引物5’端加上生

2、物素修飾用于擴增病毒目的基因。將通用引物的PCR產物進行寡核苷酸陣列雜交，加入標記有堿性磷酸酶的鏈霉抗生物素蛋白(鏈親和素)，與雜交產物上標記的生物素結合。隨后加入BCIP／NBT顯色底物，陽性結果顯現(xiàn)藍紫色，根據顯色結果檢測HBV基因型。2擴增B、C、D型病毒質粒的目的基因用于寡核苷酸陣列方法的優(yōu)化。3寡核苷酸陣列對169份血清的基因型進行檢測，對不能確定基因型及檢測結果為D型的血清，對其PCR產物進行核苷酸測序，序列輸入DNASIS

3、中，與已發(fā)表的HBV基因型序列進行同源性比較，明確其基因型。對檢測結果為B、C基因型的血清用限制性內切酶方法明確基因型。確定寡核苷酸陣列的準確性。4根據169名孕婦的HBVDNA復制水平分為1組DNA103copy／ml，2組DNAl03copies／m1，3組DNAIO”9copies／ml。檢測相同基因型在不同復制水平宮內感染發(fā)生的差異；同一復制水平不同基因型宮內感染的差異。統(tǒng)計學處理將所有數據輸入SPSSIO0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分