外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的EGFR突變的檢測.pdf

1、目的:
　　 建立一種NSCLC患者外周血CTC的EGFR基因突變檢測技術(shù),以使NSCLC患者在EGFR-TKI治療的獲益。
　　 方法:
　　 首先將H1975細(xì)胞株混入抽取的正常人血液內(nèi),模擬NSCLC患者外周血。使用免疫磁珠陰性法富集CTC,再使用免疫熒光染色的方法鑒別循環(huán)腫瘤細(xì)胞,并嘗試了FISH法輔助鑒別CTC。比較了包括激光顯微切割(LCM)在內(nèi)的多種單細(xì)胞分離技術(shù)。對比研究了單細(xì)胞和多細(xì)胞PCR的擴(kuò)

2、增陽性率；研究了單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增(WGA)與巢式PCR擴(kuò)增陽性率的關(guān)系；并使用測序的方法進(jìn)行了單細(xì)胞EGFR基因突變檢測。
　　 結(jié)果:
　　 通過免疫磁珠陰性富集和免疫熒光染色,混入血液內(nèi)的H1975細(xì)胞回收率達(dá)到77.2±9.5％；并論證了LCM對本實驗的適用性和意義。多細(xì)胞PCR的陽性擴(kuò)增率也僅為50％,不顯著優(yōu)于單細(xì)胞PCR。使用WGA不能明顯的提高巢式PCR的擴(kuò)增陽性率,但是對于單細(xì)胞的多位點檢測有重要的意義