白血病抑制因子、同源框基因在多囊卵巢綜合征的子宮內(nèi)膜表達(dá)及在睪酮、胰島素作用的內(nèi)膜細(xì)胞中表達(dá)變化.pdf

1、多囊卵巢綜合征(p01ycystic ovarian syndrome,PCOS)是一種發(fā)病多因性,病理生理和臨床表現(xiàn)多態(tài)性的內(nèi)分泌綜合征,是導(dǎo)致育齡期婦女不孕的內(nèi)分泌及代謝紊亂性疾病.PCOS患者以長期無排卵、高雄激素血癥(hyperandrogenemia,HA)、胰島素抵抗(insulin resistance,IR)和高胰島素血癥(hyperinsulinemia,HI)為基本特征.其病理生理變化涉及范圍廣,包括遺傳、神經(jīng)內(nèi)分泌

2、、糖脂代謝和卵巢局部調(diào)節(jié)因素等的異常變化,至今其病因和發(fā)病機(jī)制未完全闡明,是婦科內(nèi)分泌領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一.近來,對PCoS的研究不再局限于病因方面,PCOS患者特征性內(nèi)分泌和代謝變化對其子宮內(nèi)膜的復(fù)雜影響已構(gòu)成了PCOS研究領(lǐng)域中的重要組成部分,為提高PCOS患者的妊娠率,降低流產(chǎn)率提供了新的思路. PCOS患者經(jīng)促排卵治療后,其排卵障礙可被成功糾正,但最終妊娠率低,而自然流產(chǎn)率卻很高.傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為:子宮內(nèi)膜是卵巢分泌的甾體激素

3、作用的靶器官,但越來越多的證據(jù)發(fā)現(xiàn),子宮內(nèi)膜具有自分泌和旁分泌作用,自身可分泌多種細(xì)胞因子,生長因子、蛋白等.PCOS患者特征性內(nèi)分泌和代謝變化對其子宮內(nèi)膜發(fā)育和對子宮內(nèi)膜容受性的影響,逐漸受到眾多學(xué)者的重視.白血病抑制因子(1eukemia inhibi tor factor,LIF)在人的卵巢和卵泡液、子宮內(nèi)膜和蛻膜、滋養(yǎng)細(xì)胞和輸卵管等生殖器官和部位均表達(dá),被認(rèn)為是與內(nèi)膜容受性維持密切相關(guān)的生化標(biāo)志之一.子宮內(nèi)膜的發(fā)育和其容受性的建

4、立需要同源框基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié).同源框基因(homeobox gerle,HOX)中}tOXA10作為一種多效性的轉(zhuǎn)錄因子參與胚胎種植的多個環(huán)節(jié),如: 子宮內(nèi)膜的增殖與分化、子宮內(nèi)膜容受性的建立、胚胎的定位及黏附、胞飲突形成、蛻膜化等,它的持續(xù)表達(dá)是胚胎著床和成功妊娠所必需的.PCOS患者內(nèi)膜容受性是否異常,胚胎和內(nèi)膜間信號傳遞是否有缺陷?而體內(nèi)的HA和HI是否是其內(nèi)膜容受性異常的直接原因?如何選擇提高PCOS患者妊娠率,降低其流產(chǎn)率的最佳

5、治療方案?針對這些問題,國內(nèi)尚未見報(bào)道.目的1.觀察不同組織學(xué)分期的正常對照和PCOS患者子宮內(nèi)膜中LIF、HOXA10的表達(dá)情況,探討LIF和IIOXAlO與PCOS內(nèi)膜容受性的關(guān)系. 2.體外培養(yǎng)高分化子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞(Ishikawa)作為模式,研究不同濃度的睪酮(testosterone,T)、胰島素(inmllin,INS)作用后,細(xì)胞LIF、HOXA10的表達(dá)情況.探尋高T和高LNS對其表達(dá)的影響,試圖尋找引起PCO

6、S患者內(nèi)膜容受性異常的原因,為探討提高PCOS患者妊娠率,降低其流產(chǎn)率的最佳治療方案提供依據(jù). 材料與方法 1.組織學(xué)研究:(1)病例組:已婚PCOS患者14例,平均年齡(28.14±3.53)歲.(2)對照組:已婚不孕癥患者16例(不孕原因?yàn)槟蟹揭蛩鼗蜉斅压芄Ｗ?擬行體外受精一胚胎移植治療),平均年齡(30.86±2.61)歲.PCOS組于月經(jīng)周期的5-14天和使用氯米芬(clomiphene citrate,CC)/

7、人絕經(jīng)期促性腺激素(human menopatlsal gonadotropin,HMG)/人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)方案促排卵周期的著床窗口期(陰道超聲監(jiān)測確認(rèn)排卵后7-8天);對照組于月經(jīng)周期的5-14天和自然周期的著床窗口期(陰道超聲監(jiān)測確認(rèn)排卵后7-8天),均在無菌操作下采集子宮內(nèi)膜標(biāo)本.行HE染色證實(shí)分期,并采用免疫組織化學(xué)染色法(immllnohistochemic

8、al method)檢測LIF、HOXA10表達(dá)情況. 2.細(xì)胞培養(yǎng):體外培養(yǎng)Ishikawa.細(xì)胞,分別采用濃度為10<'-8>mol/l、10<'-6>mol/l、10<'-4>mol/l的T溶液作用細(xì)胞24小時(shí)和48小時(shí),使用免疫細(xì)胞化學(xué)法(immunocvtochemical method)檢測不同濃度組和不同時(shí)間組LIF、HOXA10表達(dá)情況,并使用酶聯(lián)免疫吸附法(ermyme linked immunosorbent ass

9、ay,ELISA)檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LIF的水平.分別采用濃度為10IU/1、30IU/1、90IU/1的INS溶液作用細(xì)胞24小時(shí),使用ELISA法檢測各濃度組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LIF的水平. 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以α=0.05作為差異有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的檢驗(yàn)水準(zhǔn). 結(jié)果 1.研究對象一般情況比較:PCOS組與對照組相比,年齡、體重質(zhì)量指數(shù)(body massind

10、ex,BmI)的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t<,1>=-1.635,P>0.05;t<,2>=1.448,P>0.05). 2.研究對象子宮內(nèi)膜病理比較:PCOS組間質(zhì)反應(yīng)不良和分泌反應(yīng)欠佳發(fā)生率均高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05;P<0.01). 3.LIF在兩組子宮內(nèi)膜的表達(dá):LIF以腺上皮細(xì)胞的胞漿表達(dá)為主.LIF在PCOS組增生期和分泌中期子宮內(nèi)膜的表達(dá)水平均低于相應(yīng)的對照組(P<0.01);而LIF在兩組分

11、泌中期的子宮內(nèi)膜的表達(dá)水平均高于其增生期(P<0.01). 4.HOXAIO在兩組子宮內(nèi)膜的表達(dá):HOXAIO在內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的胞核呈陽性表達(dá).HOXAIO在PCOS組增生期和分泌中期子宮內(nèi)膜的表達(dá)水平均低于相應(yīng)的對照組(P<0.01);而HOXAIO在兩組分泌中期的子宮內(nèi)膜的表達(dá)水平均高于其增生期(P<,1><0.05;P<,2><0.01). 5.LIF與HOXAIO的相關(guān)性:PCOS組和對照組中,LIF與HOXAIO

12、的表達(dá)水平均呈正相關(guān)(r<,1>=0.753,P<0.01;r<,2>=0.565,P<0.05). 6.LIF、HOXAIO在Ishikawa細(xì)胞的表達(dá):LIF在Ishikawa的胞漿呈陽性表達(dá),HOXAIO在Ishikawa的胞核呈陽性表達(dá). 7.T作用Ishikawa后,對LIF、HOXAIO表達(dá)的影響:作甩時(shí)間相同時(shí),除10<'-8>mol/L的T作用組與對照組間LIF表達(dá)無差異外(P>0.05),余各組間,較低

13、濃度T作用組LIF表達(dá)明顯高于較高濃度T作用組(P<0.01);而作用濃度相同時(shí),T呈時(shí)間依賴性抑制LIF的表達(dá)(t=7.672,P<0.01).同樣, T呈濃度和時(shí)間依賴的方式抑制HOXAIO的表達(dá)(F=19.71,P<0.05;t=9.516,P<0.01).且T呈濃度和時(shí)間依賴的方式抑制Ishikawa細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LIF的表達(dá)(F=37.379,P<0.01;t=5.293,P<0.05). 8.INS作用Ishika

14、wa后,對LIF表達(dá)的影響:對照組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LIF的表達(dá)水平均高于各INS作用組(F=23.70,P<0.01);而3組不同濃度的INS作用組間則無差異(P均>0.05). 結(jié)論 1.LIF和HOXA140在PCOS組和對照組子宮內(nèi)膜均呈陽性表達(dá),分泌中期表達(dá)強(qiáng)度高于增生期,提示LIF和HOXA10可能是子宮內(nèi)膜容受性的潛在標(biāo)志物. 2. LIF、ftOXA10在PCOS組各期的子宮內(nèi)膜中均呈低水平表達(dá),可