Apoptin在腫瘤治療和腫瘤發(fā)生機制研究中的應用.pdf

1、華中科技大學博士學位論文Apoptin在腫瘤治療和腫瘤發(fā)生機制研究中的應用姓名：彭冬君申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：屈伸20070401華中科技大學同濟醫(yī)學院博士學位論文4另一方面，作為腫瘤特異性的細胞凋亡素，Apoptin同樣在腫瘤相關信號通路的研究中具有重要的作用。體內和體外研究發(fā)現(xiàn)，在人腫瘤細胞及轉化細胞內Apoptin108位蘇氨酸被特異性磷酸化，Apoptin迅速移位到細胞核并誘導腫瘤細胞凋亡；而在人正

2、常細胞內Apoptin則處于未磷酸化狀態(tài)，停留在細胞質，也不誘導細胞凋亡。因此認為，在腫瘤及轉化細胞內，普遍存在著一種與腫瘤相關的磷酸激酶，將Apoptin特異性磷酸化激活。不僅如此，Apoptin還能被SV40大T抗原（LT）所建立的細胞瞬時轉化狀態(tài)所激活。以SV40早期基因產(chǎn)物（大T抗原和小T抗原）所建立的瞬時轉化作為細胞模型，以Apoptin作為細胞轉化或腫瘤發(fā)生的特異性感應蛋白，可以應用于腫瘤相關的信號通路的研究。前期研究表明，

3、截短的N端SV40T抗原（LT136st，N端大T抗原LT136和全長小T抗原st）就能夠替代全長大T抗原LT以激活Apoptin。我們進一步觀察了N端T抗原的相關功能域在Apoptin激活效應中所起的作用。結果顯示：SV40小T抗原(st)C端的PP2A結合功能域對Apoptin感應的腫瘤相關通路，起關鍵作用。有趣的是，本身不具有核定位作用的st（具有PP2A結合功能域）需要定位到細胞核才能激活Apoptin。另外，共存于LT136和

4、st的N端J功能域在結構上是必需的。LT136和st在其N端都具有完全相同的Hsc70結合功能域（即J功能域，182氨基酸）。據(jù)報道，Hsc70（熱休克蛋白類似物）分子通過其C端的多肽結合功能域發(fā)生自結合，在細胞內以二聚體或多聚體的形式穩(wěn)定存在。因此，我們推測，分別與LT136的Jdomain和st的Jdomain相結合兩個相同的Hsc70分子有可能發(fā)生自結合，形成包括兩個Hsc70分子、LT136和st的復合體。依靠LT136本身的N

5、LS、或者與LT136所結合的pRb的NLS的核定位作用，這個包含st的復合體被定位到細胞核。在核基質中，st與PP2A相結合并抑制PP2A的生物活性，從而改變或者激活Apoptin所感應的腫瘤相關信號通路，Apoptin的腫瘤特異性磷酸激酶被激活，進而將Apoptin特異性磷酸化激活。研究結果表明，SV40小T抗原（st）被定位到細胞核，與PP2A結合并抑制PP2A的生物活性，誘導Apoptin感應的腫瘤相關信號通路的激活。該信號通路