紅細胞停搏液對心肌缺血再灌注損傷的保護作用及其機制.pdf

1、目的:建立新西蘭大白兔Langendorff離體心灌注模型,采用紅細胞停搏液(EC)與全血停搏液(BC)和晶體停搏液(CC)作對比研究,通過檢查血流動力學(xué)改變(LVEDP、HR、LVSP、Dp/Dt<,max>及CF)、心肌酶譜(CK、LDH)、心肌代謝指標(Glu)、心肌含水量(MWC)、組織形態(tài)學(xué)變化,心肌細胞凋亡率及凋亡相關(guān)蛋白P<'53>、Bcl-2的表達,觀察EC、BC及CC的心肌保護效果;同時觀察凋亡在缺血再灌注損傷中的作用

2、及其對心功能的影響;并研究凋亡率與凋亡相關(guān)蛋白P<'53>及Bcl-2表達間的相關(guān)性,探討EC對心肌缺血再灌注損傷保護作用分子水平的作用機制.方法:濾除血液中的白細胞和血小板,與St.ThomasⅡ液按4:1配置成EC;將18只新西蘭大白兔(2.6-3.1Kg),不分雌雄,隨機分為三組:EC組(6只)、BC組(6只)及CC組(6只).EC組麻醉、肝素化后迅速摘取心臟,冰生理鹽水中排隊心臟內(nèi)血液,灌注37℃ Krebs-Henseleit

3、(K-H)液使心臟復(fù)跳(約30min)穩(wěn)定后,灌注EC停跳60min,再灌注37℃K-H液復(fù)跳120min.于停跳前、再灌注后15min、30min、60min、120min檢測血流動力學(xué),心肌酶譜,代謝指標,實驗結(jié)束時取左心室前壁心肌組織測量MWC,在光鏡及電鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)的變化,同時采用TUNEL和FCM檢測心肌細胞凋亡率,并用免疫組織化學(xué)方法檢測心肌組織P<'53>及Bcl-2蛋白表達,同法處理BC組及CC組.結(jié)論:1、三組大白

4、兔心肌組織在停搏過程中均存在缺血再灌注損傷;在血流動力學(xué)改變、心肌酶譜、心肌代謝指標、心肌含水量、組織形態(tài)學(xué)變化,心肌細胞凋亡率等方面的對比研究結(jié)果表明,EC較BC及CC具有更加良好的心肌保護效果.2、該實驗未發(fā)現(xiàn)明顯的心肌壞死現(xiàn)象,灌注停搏液后心肌細胞因缺血再灌注損傷死亡的主要形式是凋亡,心肌細胞的凋亡對心功能具有較大的負面影響;EC在缺血再灌注損傷過程中可通過下調(diào)心肌細胞凋亡率,保護心功能.3、心肌細胞凋亡率與P<'53>蛋白表達上