川芎嗪及其硝酮衍生物對HCN4通道和竇房結細胞起搏電流的抑制作用.pdf

1、目的：探討川芎嗪（Ligustrazine，TMP）及其硝酮衍生物（TBN）對超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道（hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel，HCN）基因家族亞型HCN4參與編碼的超極化激活的陽離子通道電流（If）和家兔竇房結細胞動作電位的影響。
　　方法：利用標準的雙極電壓鉗和標準玻璃微電極技術記錄表達在非洲爪蟾卵母細胞上的H

2、CN4通道電流以及家兔竇房結動作電位。
　　結果：正常表達在卵母細胞上的HCN4通道電流，給予1μM、10μM、100μM川芎嗪（TMP）后，以濃度依賴性方式阻斷HCN4參與編碼的If電流，其半數最大效應濃度[IC50]為48.79±3.1μmol/L，希爾系數為1.01±0.3。另一組實驗中，1μM、10μM、100μM TBN同樣以濃度依賴性方式減小If電流，其[IC50]值為17.20±1.1μmol/L，希爾系數為1.01

3、±0.4。此外，在家兔竇房結動作電位實驗中，100μM TMP使家兔竇房結細胞動作電位（Action potential, AP）4期自動去極化速率（phase-4 spontaneous depolarization rate，DDR）由正常的19.53±1.2 mV/s減小到13.79±1.0 mV/s，而100μM TBN可使DDR從正常的21.16±1.4 mV/s減少到7.10±1.9 mV/s。為了進一步證實TBN強大的抗氧

4、化作用，我們在竇房結AP實驗中預先給予100μM過氧化氫（H2O2）灌流，然后分別加入100μM TMP和100μM TBN以觀察其作用效果。結果顯示：100μM H2O2明顯加快竇房結4期DDR，從正常的20.98±1.28 mV/s和21.66±1.1 mV/s增加到33.24±2.3 mV/s和35.71±2.1 mV/s（n=6，P<0.01 versus Control）。給予100μM TMP后，4期DDR從33.24±2.

5、3 mV/s降低到23.57±2.44 mV/s（n=6，P<0.01 versus H2O2）；而100μM TBN明顯減小H2O2誘導增大的4期DDR（35.71±2.1 mV/s to12.27±2.23 mV/s，n=6，P<0.01 versus H2O2）。
　　結論：①TMP及TBN對表達在卵母細胞上HCN4參與編碼的超極化激活的陽離子通道電流（If）和家兔竇房結AP DDR均有明顯的抑制作用；②還可降低H2O2誘導