小麥DERB及EREBP類轉錄因子的特性分析.pdf

1、植物在生長過程中，會遇到諸如干旱、低溫和高鹽的非生物逆境脅迫影響。逆境條件下植物對環(huán)境刺激作出反應，通過一系列信號傳遞過程最終激發(fā)轉錄因子，啟動基因的轉錄和表達來抵御外界得脅迫傷害。轉錄因子對基因的轉錄調控起至關重要的作用。 本實驗室構建了干旱誘導的小白麥cDNA文庫，并且從中克隆了W23,W18,W17等基因。通過生物信息學的方法進行比對發(fā)現(xiàn)這些基因都含有60個左右氨基酸的AP2/EREBP保守域，都屬于AP2/EREBP基因

2、家族。W23,W18，屬于DREB家族，W17屬于EREB家族。 本論文是在此基礎上，通過體外結合實驗和體內轉錄激活實驗來進一步證明它們表達產物的功能特性，為轉基因分析和研究轉錄因子在信號轉導中的調控機理做理論基礎研究。 凝膠阻滯實驗表明W23和W18能和DRE探針特異結合，推測其能夠調控含有DRE順式元件的下游基因的轉錄表達；W17能和ERE探針特異結合，推測其能夠調控含有ERE順式元件的下游基因的轉錄表達。這些基因編

3、碼的產物是特異結合順式元件的，這符合轉錄因子的結合特性。同時基因產物與突變探針的結合實驗也得到了順式元件中重要堿基的信息。 為了進一步證明這些轉錄因子的激活特性，本實驗將構建好的表達載體轉化到帶有DRE和ERE順式元件的酵母報道子中。轉錄激活實驗表明這些轉錄因子不但具有結合區(qū)，能特異結合到順式元件上，并且有轉錄激活的功能。而且它們的轉錄激活特性是不一樣的。這符合關于同一類的轉錄因子的DNA結合區(qū)比較保守，但它們的激活區(qū)是不同的研