香煙煙霧提取物對人內皮細胞細胞色素C氧化酶活性及細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：探討香煙煙霧提取物(cigarette smoking extract，CSE)對體外培養(yǎng)的人內皮細胞細胞色素C氧化酶(cytochrome c oxidase，COX)活性及細胞凋亡的影響。 方法：體外培養(yǎng)人內皮細胞(ECV304)，取對數(shù)生長期細胞用于試驗。一支去過濾嘴燃燒的香煙由負壓吸引驅動裝置連續(xù)抽吸，吸入煙霧，經三通管的一個出口入無血清1640培養(yǎng)液中制成懸液，過濾除菌，用無血清的1640培養(yǎng)液稀釋成不同濃度，1

2、 h內用于實驗。整個試驗分為兩個部分：1.內皮細胞培養(yǎng)，按照CSE干預濃度不同，將試驗分為四組：0％CSE組、0.5％CSE組、1％CSE組、5％CSE組。各組細胞培養(yǎng)12h后，采用MTT法檢測CSE對內皮細胞增殖的影響，流式細胞術檢測細胞凋亡的情況，生物化學的方法檢測COX活性的改變。2.用5％CSE分別干預內皮細胞0小時、6小時、12小時、24小時后，采用MTT法檢測細胞增殖的情況，流式細胞術檢測細胞凋亡的情況，生物化學法檢測COX

3、活性的變化。投射電子顯微鏡觀察5％CSE干預24小時組和非CSE干預組內皮細胞超微結構。數(shù)據以-x±s表示，SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析，采用Bartlett法行方差齊性檢驗，多組間均數(shù)比較采用One-WayANOVA分析，兩兩比較采用LST-t驗，檢驗水準α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果：(1)COX活性的檢測：①不同濃度CSE分別干預12h：0％CSE組、0.5％CSE組、1％CSE組、5％CSE組CO

4、X活性依次為(0.689±0.028)U/mg、(0.606±0.027)U/mg、(0.547±0.016)U/mg、(0.411±0.017)U/mg，隨著CSE濃度的增高，COX活性逐漸降低，各組之間比較均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)，且5％CSE組COX活性降低最明顯。②5％CSE分別干預不同時間：0h組、6h組、12h組、24h組COX活性依次為(0.764±0.030)U/mg、(0.598±0.029)U/mg、(0.4

5、30±0.035)U/mg、(0.324±0.051)U/mg，隨著干預時間的延長，COX活性逐漸降低(P均<0.01)，24h組COX活性下降最明顯。(2)MTT結果：①不同濃度CSE分別干預12h：0％CSE組、0.5％CSE組、1％CSE組、5％CSE組OD值依次為(1.047±0.033)、(0.997±0.010)、(0.823±0.005)、(0.764±0.007)，隨著CSE濃度的增高，OD值逐漸下降(P均<0.01)，

6、以5％CSE組下降最明顯。@5％CSE分別干預不同時間：0h組、6h組、12h組、24h組0D值依次為(0.956±0.029)、(0.883±0.050)、(0.753±0.015)、(0.624±0.011)，0h組與6h組比較OD值有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，其余各組間比較則有明顯統(tǒng)計學差異(P<0.01)。(3)流式細胞儀檢測結果：①不同濃度CSE分別刺激12小時：0％CSE組、0.5％CSE組、1％CSE組、5％CSE組凋亡

7、率分別為(1.61±0.24)％、(2.01±0.36)％、(2.31±0.26)％、(5.41±0.39)％，0.5％CSE組與0％CSE組比較其凋亡率無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，余各組間均存在統(tǒng)計學差異(P均<0.05)。②5％CSE分別干預不同時間：0h組、6h組、12h組、24h組凋亡率分別為(1.73±0.16)％、(2.86±0.15)％、(5.39±0.57)％、(8.87±0.41)％，各組間比較均有統(tǒng)計學意義(P均<

8、0.05)。(4)投射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)CSE干預組內皮細胞體積縮小，細胞皺褶不規(guī)則，胞漿和細胞核濃縮，核膜裂解，核仁消失，染色質邊緣化或分割成塊狀，形成凋亡小體。 結論： (1)香煙煙霧提取物(CSE)可抑制內皮細胞細胞色素C氧化酶(COX)活性，呈濃度和時間依賴性。 (2)香煙煙霧提取物(CSE)可誘導內皮細胞凋亡，呈濃度和時間依賴性。 (3)細胞色素C氧化酶(COX)活性下降在CSE所致內皮細胞凋亡中可能