葡萄土壤桿菌E26菌株細菌素產生相關基因的初步研究.pdf

1、無致病性的葡萄土壤桿菌AgrobacteriumvitisE26菌株是防治葡萄根癌病中很有應用前景的生防菌株，細菌素的產生是該菌株生防機制中的重要因素。本研究采用轉座子誘變技術對E26菌株進行誘變，共獲得15,000株有mini-Tn5插入的接合子，通過平皿抑菌檢測這些接合子對葡萄根癌病致病菌AgrobacteriumvitisK308的抑制作用即其細菌素產生情況，共獲得31株產素突變株，其中29株產素能力不同程度減弱，分別命名為A1-

2、A29，2株產素能力完全喪失，命名為B1和B2。產素突變株產素能力改變程度的不一致表明了E26菌株細菌素的合成涉及到多個基因。將31個突變株分別與致病菌K308混合接種指示植物向日葵，結果顯示，與野生型E26菌株相比，產素能力喪失的2個突變株B1和B2的生防能力都有所下降，29個產素能力減弱的突變株中有13個突變株的生防能力有所下降，E26菌株產素能力的下降與生防能力的下降之間存在極顯著的正相關。提取31個突變株的總DNA和質粒DNA，

3、將其質粒與野生型E26菌株的質粒進行比較后，以mini-Tn5片段為探針，進行斑點雜交，結果顯示，31個產素突變株的質粒都未發(fā)生轉移或丟失，2個產素能力喪失的突變株和6個產素能力減弱的突變株其突變基因位于質粒上，另外23個產素能力減弱的突變株其突變基因位于染色體上，由此可推導出土壤桿菌E26菌株產素性狀與質粒和染色體都相關。本研究還選取了突變株A5、A25和B1進行了轉座子側翼序列的克隆，序列比較表明A5的側翼序列與Sinorhizob