利用RAPD、ISSR標記分析鄂西地區(qū)柚種質資源遺傳多樣性.pdf

1、中國是柑桔的起源中心和遺傳變異中心之一,柚的品種資源十分豐富.該研究以分布在鄂西的柚種質資源為對象,利用RAPD和ISSR分子標記對其進行研究,分析鄂西柚品種(類型)的遺傳多樣性.結果如下:1.對照常規(guī)RAPD和ISSR工作分析程序,在對鄂西柚種質資源分析時作了部分調整,如DNA提取,PCR反應體系等細節(jié).建立了一套適合于分析柚種質資源的RAPD和ISSR反應體系.該研究中建立的適合于柚種質資源分析的RAPD最佳反應體系為:DNA(20

2、ng/μL),引物(1μmol/L),MgCl<,2>(1.5mM),TaqDNA聚合酶1.5U,dNTPs(200μmol/L),PCR循環(huán)程序:94℃4min,一次循環(huán);94℃1min,35℃1min,72℃2min,40次循環(huán);72℃7min,一次循環(huán).ISSR最佳反應體系為:DNA(20ng/μL),引物(1μmol/L),MgCl<,2>(2.0mM),TaqDNA聚合酶1.5U,dNTPs(200μmol/L);PCR循環(huán)程

3、序:94℃4min,一次循環(huán);94℃40s,48℃~56℃60s,72℃2min,30次循環(huán);72℃7min,一次循環(huán).2.從120條RAPD隨機引物中篩選出22條在樣品間具有多態(tài)性的引物,對鄂西柚種資源65份材料進行RAPD分析,擴增共產生207條RAPD標記帶,其中多態(tài)性帶104條,多態(tài)性百分率為50.2﹪;從50條ISSR引物中共篩選出13條在所有樣品中均能產生清晰擴增帶的ISSR引物,擴增共產生136條ISSR標記帶,其中多態(tài)性

4、帶82條,多態(tài)性百分率為60.3﹪.檢測效果表明,ISSR效果明顯優(yōu)于RAPD.2.根據RAPD和ISSR結果聚類分析,表明鄂西柚種資源單株間遺傳差異明顯.根據DNA標記數據轉化遺傳距離矩陣所作UPGMA樹系圖表明,RAPD聚類結果和ISSR聚類結果均可將所有材料劃分為3大類群,3大類群內聚集的柚類型間遺傳差異比較大,分化明顯.該地區(qū)內沙田柚存在較大差異,長壽沙田柚的幾個類型和來自廣東、廣西的沙田柚類型聚類明顯比較分散,其地區(qū)性差異顯著