14164.大腸桿菌胸苷激酶和聚磷酸激酶的重組表達與應用研究

1、分類號：UDC：Q78密級：華東理工大學學位論文大腸桿菌胸苷激酶和聚磷酸激酶的重組表達與應用研究張廣宇指導教師姓名：歐伶副教授華東理工大學生物工程學院申請學位級別：碩士專業(yè)名稱：生物化學與分子生物學論文定稿日期：2013年10月論文答辯日期：2013年10月學位授予單位：華東理工大學學位授予日期：答辯委員會主席：盧艷花教授評閱人：趙健教授王富軍副教授華東理工大學碩士學位論文第1頁大腸桿菌胸苷激酶和聚磷酸激酶的重組表達與應用研究摘要胸苷激

2、酶(TK)是大腸桿菌胸苷酸補救代謝途徑中的關鍵酶之一，該酶在M92存在下，可以腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)作為磷酸基團的供體，催化胸苷(TR)磷酸化，生成胸苷酸(TMP)。聚磷酸激酶(PPK)可以多聚磷酸為底物，并將磷酸基團轉移至ADP生成ATP。利用聚磷酸激酶的這種特性，將其與大腸桿菌中的胸苷激酶催化的反應偶聯，可有效地形成ATP循環(huán)，將多聚磷酸中的磷酸基團以ArP為中介，轉移至胸苷，生成胸苷酸。本研究主要是構建含胸苷激酶和聚磷酸激酶基

3、因的重組菌株，以此將兩個反應聯系起來，形成一個以ATP為中介的能量循環(huán)體系，實現胸苷酸的不斷生成。將大腸桿菌K12的胸苷激酶基因，蹴和聚磷酸激酶基因即尼，分別克隆到pET28a表達載體上，并轉入大腸桿菌BL21(DE3)中，構建了重組菌株DTK和DPK，同時構建了串聯共表達重組菌株DKK。經IPTG誘導表達后，sDs—PAGE分析可得，各重組菌株均可表達出可溶性酶蛋白，并對各蛋白的酶活性進行分析，發(fā)現重組菌表達出的酶活力遠遠高于大腸桿菌