凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)C-型凝集素免疫作用機制的研究.pdf

1、本文研究了C-型凝集素對凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）免疫作用調(diào)節(jié)機制的影響。主要探討了：
　?。?）凡納濱對蝦C-型凝集素的原核表達；
　?。?）脂多糖、重組C-型凝集素蛋白對凡納濱對蝦血細胞酚氧化酶原激活系統(tǒng)和信號傳導的影響；
　?。?）哈維氏弧菌、重組C-型凝集素對凡納濱對蝦酚氧化酶原激活系統(tǒng)和信號傳導的影響。主要結(jié)果如下：
　　1、凡納濱對蝦C-型凝集素基因的原核表達和活性檢驗

2、r>　　本文根據(jù)凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）C-型凝集素基因（C-lectin）cDNA序列設計引物，構建C-型凝集素基因原核表達載體，實現(xiàn)了該基因在大腸桿菌（Escherichia coli）中的原核表達，并檢測了重組C-型凝集素的免疫活性。結(jié)果表明：重組C-型凝集素經(jīng)SDS-PAGE分析顯示在39kD處有顯著誘導條帶，與預測的分子量大小基本一致，Western blot分析可以與anti-His抗體特異性結(jié)

3、合，從而證明C-型凝集素重組蛋白在大腸桿菌中成功表達。重組C-型凝集素對小鼠和兔的紅細胞沒有明顯的凝集作用，而對所選5種細菌的凝集作用存在差異，其中對大腸桿菌具有明顯的凝集作用，而對溶藻弧菌、哈維氏弧菌、鰻弧菌和金黃色葡萄球菌均無凝集現(xiàn)象。
　　2、重組C-型凝集素對凡納濱對蝦血細胞免疫作用的研究
　　本文采用血細胞懸浮培養(yǎng)的方法，研究了重組C-型凝集素對凡納濱對蝦血細胞免疫作用的影響。實驗梯度設置為：對照組、重組C-型凝集

4、素蛋白組（Lvlec，1mg/mL）、脂多糖組（LPS,1.0mg/L）、脂多糖+重組C-型凝集素蛋白（LPS+Lvlec，1.0mg/L+1mg/mL），分別在0、3、6、9、12、24h取培養(yǎng)的血細胞和培養(yǎng)液進行免疫相關指標的測定。結(jié)果表明：重組C-型凝集素對凡納濱對蝦血細胞數(shù)量、存活率和吞噬率、凝集活力影響顯著（P<0.05）；各處理組培養(yǎng)液酚氧化酶活力在培養(yǎng)3-12h內(nèi)呈峰值變化，于9h時達到最大值（P<0.05）。血細胞cGM

5、P含量、PKA活力在3-12h內(nèi)呈峰值變化，各處理組均于9h時達到最大值，然后均恢復至對照組水平。由此可見，LPS、Lvlec對凡納濱對蝦血細胞具有明顯的免疫調(diào)控作用，能激活酚氧化酶原系統(tǒng)，引發(fā)一系列免疫防御反應。
　　3、注射重組C-型凝集素對凡納濱對蝦免疫防御機制的影響
　　本文采用人工注射的方法，研究了重組C-型凝集素對凡納濱對蝦免疫作用的影響，實驗梯度設置為：對照組、重組C-型凝集素蛋白（Lvlec protein，

6、1.0mg/mL）、哈維氏弧菌組（V.harveyi，106cfu/mL）、哈維氏弧菌+重組C-型凝集素蛋白（V.harveyi+Lvlec protein，106cfu/mL+1.0mg/mL）處理組，分別在0、3、6、9、12、24h取樣品測定。結(jié)果表明：注射哈維氏弧菌懸液和重組C-型凝集素蛋白對凡納濱對蝦血細胞數(shù)量、血細胞酚氧化酶原、酚氧化酶活力、凝集活力、吞噬率、溶菌活力和cGMP含量、PKA活力影響顯著（P<0.05），而對照