弓形蟲單克隆抗體的制備及生物學活性的初步鑒定.pdf

1、剛地弓形蟲(T.gondii)是一種全球性的人畜共患寄生蟲，該種寄生蟲病的流行與傳播不僅嚴重地影響著畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，同時也對人類的生命與健康造成嚴重的威脅及危害。本實驗目的在于利用分子生物學中的蛋白表達技術及單克隆抗體的制備等分子及免疫學相關技術，選用弓形蟲速殖子抗原及膜表面主要致病性抗原P30作為免疫原，制備出弓形蟲單克隆抗體為接下來建立弓形蟲病快速、簡便診斷方法和進一步的研究打下基礎。
　　 通過對弓形蟲P30基因的PC

2、R擴增、克隆、測序，成功的構建了原核表達重組質粒pET32a-P30，并成功的誘導表達了弓形蟲P30重組蛋白抗原，經純化制備出了可溶性弓形蟲P30重組蛋白抗原。同時采用小鼠腹腔收集弓形蟲速殖子方法，用胰蛋白酶法純化制備了弓形蟲速殖子抗原，為后續(xù)試驗提供了免疫抗原。
　　 用弓形蟲P30重組蛋白抗原和弓形蟲速殖子抗原分別免疫小鼠、經細胞融合，利用建立的間接ELISA方法對融合胞融克隆進行檢測篩選，成功的用表達的P30蛋白制備了2株

3、單克隆抗體雜交瘤細胞分別命名為5：D5、2A1；用速殖子抗原制備了2株單克隆抗體雜交瘤細胞，分別命名為586、2D2。
　　 對這4株雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體的生物學特性進行了鑒定：經間接ELISA測定5：B6、2D2、5D5、2A1四株雜交瘤細胞單克隆抗體上清的效價分別為：1:800、1:1600、1:3200、1:6400；腹水效價分別為：1:104、1:104、1:105、1:105；經單克隆抗體亞型鑒定，4株單克隆抗體

4、586、2D2、5D5、2A1亞型分別為：Ig G1，Ig M，Ig G1和Ig M；染色體計數結果顯示：4株雜交瘤細胞染色體計數為90～110條，均大于親本細胞；經間接ELISA檢測和SPSS統(tǒng)計軟件進行方差分析，四株雜交瘤細胞第一代、第十代細胞培養(yǎng)上清OD450值差異不顯著，均能穩(wěn)定分泌單克隆抗體。
　　 廣西地區(qū)是人畜弓形蟲病流行的地區(qū)，本實驗成功的制備了抗弓形蟲速殖子抗原和弓形蟲P30重組蛋白抗原的單克隆抗體，并對其生物