兩種黃瓜A-半乳糖苷酶基因全長cDNA克隆與序列分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、α-半乳糖苷酶(α-galactosidase，EC3.2.1.22)是廣泛存在于高等植物、動物和微生物中的一類重要水解酶。本實驗室根據(jù)其他物種中α-半乳糖苷酶序列的保守區(qū)段，已經(jīng)克隆了4種黃瓜α-半乳糖苷酶的全長cDNA序列。通過已公布的黃瓜基因組序列，根據(jù)同源性分析，發(fā)現(xiàn)黃瓜基因組中還存在另兩種α-半乳糖苷酶基因。
　　 本論文利用反轉(zhuǎn)錄PCR(reversetranscription-PCR，RT-PCR)和cDNA末端快

2、速擴增(RapidamplificationofcDNAends，RACE)技術(shù)克隆了這兩種酶的cDNA全長，分別命名為:黃瓜酸性α-半乳糖苷酶Ⅲ和黃瓜堿性α-半乳糖苷酶Ⅲ，GenBank登錄號分別為JN680267和JQ327828，序列結(jié)果表明:黃瓜酸性α-半乳糖苷酶Ⅲ基因編碼430個氨基酸，編碼的蛋白質(zhì)理論分子量為47.9KD。黃瓜堿性α-半乳糖苷酶Ⅲ基因編碼783個氨基酸，編碼的蛋白質(zhì)理論分子量為86.1KD。對根據(jù)cDNA序列

3、推斷出的蛋白質(zhì)序列分析結(jié)果表明，酸性α-半乳糖苷酶Ⅲ蛋白C端存在一段信號肽，將定位于液胞中，而堿性α-半乳糖苷酶Ⅲ則分布于細胞質(zhì)中。
　　 收集目前GenBank中已發(fā)布的高等植物的α-半乳糖苷酶序列，聚類分析結(jié)果表明，酸性α-半乳糖苷酶可分為3組，黃瓜的3種酸性α-半乳糖苷酶分屬其中的1組;堿性α-半乳糖苷酶分為3組，其中每組均包含黃瓜的1種堿性α-半乳糖苷酶。結(jié)合相關(guān)報道，對這6組酶的生物學(xué)功能進行了總結(jié)分析，結(jié)果表明:酸性

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