陸地棉耐鹽相關(guān)基因(GhPTAC、GhGnT)克隆及其表達(dá)分析.pdf

1、土地鹽堿化已成為一個(gè)世界關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題,解決土地鹽堿化問(wèn)題已成為全球性難題。在輕度或部分中度鹽堿地上種植比較耐鹽的作物,是一種簡(jiǎn)便、快捷、經(jīng)濟(jì)有效的改良措施。棉花作為重要的經(jīng)濟(jì)作物和鹽堿的先鋒作物,已成為鹽堿地改良及其相關(guān)研究的重要研究材料。通過(guò)分子生物學(xué)手段研究棉花耐鹽基因及作用機(jī)制,從而為提高棉花耐鹽能力,培育耐鹽品種開辟新的途徑。本研究以耐鹽材料中9806和鹽敏感材料中S9612為實(shí)驗(yàn)材料,通過(guò)基因芯片技術(shù)及抑制性差減文庫(kù)技術(shù)篩選

2、到兩個(gè)耐鹽相關(guān)基因,利用RACE及RT-PCR技術(shù)克隆了它們的cDNA全長(zhǎng),命名為GhPTAC和GhGnT。利用熒光定量PCR技術(shù)對(duì)兩個(gè)基因做了耐鹽相關(guān)性表達(dá)分析,并通過(guò)GFP亞細(xì)胞定位和酵母表達(dá)技術(shù)對(duì)GhGnT基因做了進(jìn)一步研究。具體研究成果如下:
　　 1獲得2個(gè)耐鹽相關(guān)基因cDNA全長(zhǎng)
　　 利用RACE及RT-PCR技術(shù)獲得GhPTAC和GhGnT基因cDNA全長(zhǎng)序列。其中GhPTAC基因cDNA全長(zhǎng)1564bp

3、,它包括5’-UTR41bp,完整開放閱讀框1038bp,3'-UTR485bp,編碼345個(gè)氨基酸殘基的多肽。GhGnT基因cDNA全長(zhǎng)2140bp,它包括5'-UTR587bp,完整開放閱讀框13531313和3'-UTR200bp,編碼450個(gè)氨基酸殘基的多肽。
　　 2 Real-time PCR分析
　　 種子萌發(fā)期熒光定量結(jié)果顯示:在一定范圍內(nèi),隨著鹽脅迫程度的增加,GhPTAC基因在中S9612中表達(dá)量逐漸

4、上升,在中9806中的表達(dá)量逐漸下降；GhGnT基因在兩個(gè)材料中表達(dá)量都是先上升,再下降。苗期熒光定量結(jié)果顯示:GhPTAC基因在兩個(gè)材料中受鹽誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá),但在中9806中的表達(dá)量明顯高于中S9612；GhGnT基因在兩個(gè)材料中受鹽誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá),在中S9612中對(duì)鹽脅迫應(yīng)答較快,但表達(dá)量低于中9806。熒光定量檢測(cè)發(fā)現(xiàn),兩個(gè)基因的表達(dá)量變化與鹽脅迫密切相關(guān)。
　　 3 GhGnT基因編碼蛋白的亞細(xì)胞定位
　　 構(gòu)建PB