萍鄉(xiāng)紅鯽Hira基因的克隆、表達分析及多克隆抗體制備.pdf

1、萍鄉(xiāng)紅鯽(Pingxiang red-transparent crucian carp,Carassius auratus var.Pingxiangnensis)是分布在江西省萍鄉(xiāng)地區(qū)的天然三倍體鯽突變體,經人工選育后獲得的遺傳性狀基本穩(wěn)定的后代,具有兩性生殖和雌核發(fā)育兩種生殖方式。
　　 Hir/Hira基因是一種組蛋白基因表達負調節(jié)因子,其產物HIR/HIRA作為組蛋白的伴侶蛋白,廣泛存在于多種生物體內發(fā)揮不同的作用。HI

2、RA蛋白家族最顯著的特點是氨基酸序列N端存在7個高度同源的WD40結構域,此結構域常介導蛋白質之間的相互作用,參與多種細胞功能的調節(jié),在信號轉導、蛋白運輸、染色體修飾、轉錄或RNA加工、細胞凋亡等過程中具有重要作用。另據(jù)報道稱Hira基因可能對魚類精核解凝發(fā)揮重要作用。因此,本研究以萍鄉(xiāng)紅鯽為材料,對Hira基因在三倍體魚類中基因構成及表達特征進行了初步探索,為研究該基因在生殖發(fā)育過程中的作用打下基礎。主要內容如下:
　　 1.

3、采用SMART cDNA合成和RACE-PCR等技術,克隆得到全長cDNA序列,長度為3851bp,包含一個3033bp的開放閱讀框,編碼1010個氨基酸。為提交和查閱序列方便,將此序列命名為 C.auratusvar.Pingxiangnensi-HIRA(簡寫為Cavp-HIRA),并提交到NCBI錄入GenBank中,登錄號為HM067834。另外,通過生物軟件分析,發(fā)現(xiàn)萍鄉(xiāng)紅鯽Hira基因與銀鯽Hira基因在進化分類上存在較高的

4、同源性,并且在其推導氨基酸序列N端包含7個WD40區(qū),因而推定萍鄉(xiāng)紅鯽HIRA屬于HIRA蛋白家族。
　　 2.利用熒光定量PCR技術檢測了Hira基因在萍鄉(xiāng)紅鯽心、肝、脾、腎、腦、肌肉、精巢、卵巢等組織中的表達情況,結果發(fā)現(xiàn)該基因在卵巢中大量表達,而在其余組織中存在少量表達或是不表達的情況,與所做的RT-PCR結果基本吻合。
　　 3.在克隆得到的序列開放閱讀框內,選取了一段長550bp的保守結構域進行了蛋白原核表達,