甘肅桃抗南方根結線蟲基因的分子標記研究.pdf

1、桃樹是世界上廣泛栽培的果樹之一。根結線蟲病是常見的危害桃正常生長的一種重要病害，選育抗性砧木是預防此類病害的主要途徑，尋找與抗根結線蟲性狀緊密連鎖的分子標記對桃樹育種和抗根結線蟲機理的研究有重要意義。本研究以對南方根結線蟲免疫的紅根甘肅桃和對南方根結線蟲高感品種貝蕾及其雜交所得的BC1代190株實生群體為試材，通過SSR，SRAP分子標記技術對抗南方根結線蟲基因進行了分子標記研究并構建分子遺傳連鎖圖譜，以期對培育或選育抗根結線蟲桃品種以

2、及進一步的相關研究打下一定基礎。 主要研究內容如下： （1）試驗對紅根甘肅桃和貝蕾及其隨機挑選的190株BC1代群體進行了田間南方根結線蟲卵塊的接種鑒定，經過精細管理，最終BC1群體中有107株感染南方根結線蟲，表現(xiàn)為高感，83株沒有被侵染，表現(xiàn)為免疫，鑒定結果符合1：1孟德爾遺傳規(guī)律。 （2）以CTAB法提取基因組DNA，去除RNA后作為SSR，SRAP分析的模板。試驗建立了適合桃SSR，SRAP分析的PCR反

3、應體系，SSR體系為：模板DNA1.0μL，10×buffer（MgCl2）1.0μL，dNTP0.6μL，上下游引物各（10mM）0.35μL， TaqDNApoierase（5u/ul）0.2μL，ddH2O6.5μL，共計10μL。SRAP體系為模板DNA1.0μL，10×buffer（MgCl2）2.0μL，dNTP0.6μL，引物各（10mM）0.3μL， TaqDNApoierase（5u/ul）0.2μL，ddH2O5.6

4、μL，共計10μL。 （3）從BC1群體中挑選5個感病單株和5個免疫單株分別構建感病和抗病基因池，用135對SSR引物和64對SRAP引物對紅根甘肅桃、貝蕾、基因混合池進行篩選，得到39對SSR引物和43對SRAP引物符合遺傳規(guī)律和實驗要求，經擴增電泳并統(tǒng)計分析后，共得到141條差異明顯的擴增條帶，最終構建出一個覆蓋全部8條染色體的較緊密的遺傳連鎖圖譜，覆蓋基因組總長為1267.3cM，連鎖群的平均長度為158.4 cM，標記間