藍(lán)百合快速繁殖技術(shù)的研究.pdf

1、本研究以原產(chǎn)南非的‘藍(lán)色大花’藍(lán)百合Agapanthus praecossp.orientalis‘Big Blue’為材料，分別以體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑和花器官培養(yǎng)途徑建立了快速繁殖技術(shù)體系。在體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑中，研究了愈傷組織適宜外植體的篩選、成熟胚誘導(dǎo)及再生植株馴化，其中最關(guān)鍵的技術(shù)是篩選出根莖頂端為適宜的外植體，同時進(jìn)行了體細(xì)胞胚胎發(fā)育的相關(guān)組織學(xué)研究；在花器官培養(yǎng)途徑中，通過愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽誘導(dǎo)及增殖，最后完成馴化，具體研究

2、結(jié)果如下： 1 ．為獲得藍(lán)百合無菌苗，研究比較去種翅、加洗滌劑處理過的種子和不經(jīng)過處理（CK）的種子萌發(fā)率，前者較高，為42.2％，但與已有研究相比仍較低。 2 ．在藍(lán)百合花梗組織培養(yǎng)中，花梗愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5mg/L+檸檬酸0.1mg/L，誘導(dǎo)率為13.33％；不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5mg/L+IBA0.2mg/L，不定芽分化率為56.7％，但花梗作為外植體受采樣時間限制嚴(yán)

3、重，還不能達(dá)到產(chǎn)業(yè)化要求。 3 ．在體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑中，以藍(lán)百合無菌苗根莖頂端、葉片、花梗為外植體，經(jīng)過篩選和初代培養(yǎng)，表明根莖頂端分化能力強(qiáng)，其愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為MS+PIC0.5mg/L（Picloram，毒莠定），誘導(dǎo)率為53.33％；花梗愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為MS+PIC3.0mg/L，誘導(dǎo)率為53.33％；幼葉愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+PIC2.0mg/L+6-BA0.4mg/L，誘導(dǎo)率為40.00％。基于誘

4、導(dǎo)率、外植體采集和試驗成本（PIC 濃度）等因素，確定根莖頂端為體細(xì)胞胚胎發(fā)生最佳外植體。 4 ．將愈傷組織接種到繼代培養(yǎng)基上，在MS+PIC1.0mg/L 上生長最快、最好，經(jīng)過連續(xù)培養(yǎng)，在其周圍產(chǎn)生微黃色、半透明的愈傷組織，其細(xì)胞結(jié)構(gòu)松軟，表面稍具粘性，根據(jù)已有研究報道初步定為胚性愈傷組織。 5 ．通過藍(lán)百合愈傷組織生長曲線，首次證明了愈傷組織增殖培養(yǎng)階段必須每隔3-4周繼代一次的必要性。 6 ．在成熟胚誘導(dǎo)

5、階段，產(chǎn)生球形胚和棒狀胚兩種胚狀體，球形胚后期可產(chǎn)生次生胚，最后都能形成正常植株。誘導(dǎo)胚狀體的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1mg/L+蔗糖45g/L，每g細(xì)胞鮮重可產(chǎn)生722個胚狀體，比Sakae et al.以葉片為外植體，在MS+1mg/LPIC 誘導(dǎo)產(chǎn)生的胚狀體數(shù)量（476個）提高了一半多（51.68％）。 7 ．藍(lán)百合最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.l5mg/L，根系數(shù)量多，長勢良好，健康而且粗壯。當(dāng)組培苗和體胚

6、苗大約高2-3cm時，選擇健壯的苗，即可移栽。移栽后兩周內(nèi)保持適宜的光照和濕度，成活率可達(dá)98.5％。 8 ．通過藍(lán)百合由增殖到成熟胚誘導(dǎo)階段的細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)觀測，對比禾本科植物發(fā)生方式研究可知，本項研究首次證明了藍(lán)百合在同一種培養(yǎng)物中存在兩種體細(xì)胞胚胎發(fā)生方式，即胚胎發(fā)生方式和器官發(fā)生方式。 9 ．采用藍(lán)百合根莖頂端為外植體進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，其誘導(dǎo)率比花梗誘導(dǎo)率提高40％，并獲得了成活率高達(dá)98.5％的體細(xì)胞再生植株，