農桿菌介導的PStVcp基因反向序列遺傳轉化花生的研究.pdf

1、花生是我國主要油料作物，其品質改良育種對國民的生產實踐具有重要的意義。在已報道的侵染花生的近20種病毒中，花生條紋病毒(PS tV)在我國分布最廣，花生條紋病田間發(fā)病率最高，是重要的花生病害，嚴重影響花生的產量和品質。目前在花生及其近緣種尚未發(fā)現(xiàn)抗性種質，單純通過常規(guī)育種無法解決該問題，而通過基因工程技術將外源抗病基因轉入花生栽培種則具有一定的可行性。本研究通過花生條紋病毒外殼蛋白的反向序列在花生中的遺傳轉化研究，初步建立了花生的轉化體

2、系，并進行了初步的抗病性實驗： 1 對影響花生遺傳轉化效率的外植體防褐化、Kan篩選壓、農桿菌共培養(yǎng)時間等重要因素進行了研究。 2 采用農桿菌轉化花生，成功地將 PStVcp 反向重復序列導入花生。選擇花生子葉為轉化外植體，在芽誘導，分化和誘導生根等培養(yǎng)過程中，確立了 125mg/L 卡那霉素濃度為合適的篩選壓，50mg/L 為外植體生根的最低抑制濃度。培養(yǎng)基中Glu的濃度為1mg/L 時可以有效的防止外植體褐化。外植體

3、在OD<,600>為0.2-0.3的農桿菌菌液中侵染1min后共培養(yǎng)4 d，再轉移至芽點誘導培養(yǎng)基進行2-3周的叢生芽誘導，接著在芽點篩選培養(yǎng)基中進行篩選，待長出枝條在轉移至枝條分化培養(yǎng)基進行進一步的篩選，得到了26個再生株系。 3 通過對轉化株的PCR和southern雜交檢測，表明目的片段已整合到植物基因組中。得到26株轉化株，初步檢測結果表明有3株為陽性轉化株。 4 通過ELISA檢測表明PStVcp cp基因能有