【周凌云】茶炭疽病的分子檢測(cè)及病原鑒定

1、1茶炭疽病的分子檢測(cè)及病原鑒定周凌云王沅江黃安平曾振劉紅艷（1湖南省茶葉研究所，長(zhǎng)沙410125）摘要：要：根據(jù)茶炭疽病菌與其它菌ITS序列的差異設(shè)計(jì)了1對(duì)寡聚核苷酸引物，并優(yōu)化DNA抽提方法與擴(kuò)增條件，從而實(shí)現(xiàn)了病葉準(zhǔn)確而快速的PCR檢測(cè)。分離到兩種病原菌Z1、Z2通過(guò)形態(tài)鑒定與回接實(shí)驗(yàn)初步鑒定為茶炭疽病菌，并在核酸體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列（GITS、ITS）及肌動(dòng)蛋白基因（ACT）3對(duì)引物的多基因分子聯(lián)合檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中再次被證實(shí)。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞

2、：茶炭疽病；分子檢測(cè)；病原；鑒定；癥狀MolecularDetectionPathogenIdentificationofTeaAnthraxZHOULingyunWANGYuanjiangHUANGAnpingZENGZhenLIUHongyanHunanTeaResearchInstitute，Changsha410125Abstract：Accdingtothesequenceofinternaltranscribedspacer

3、regions(ITS)oftheribosomalgene，apairofspecificprimersfthepathogenofTeaanthracnosewassynthesizedWiththeoptimizationofreactionconditionsamplificationStudyweprovidedaaccuraterapidmethodtodetectthepathogen.Z1、Z2wereisolatedb

4、eenpreliminaryidentifiedastwodifferentpathogensofteaanthracnosebymphologicalidentificationtiebackexperimentTheconclusionwastestifiedagainbymoleculardetectionofthreeprimes(GeneralITSITSActingenegene).Keywds:Teaanthracnose

5、；Moleculardetection；Pathogen；Identify；Symptom基金項(xiàng)目：湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院創(chuàng)新項(xiàng)目作者簡(jiǎn)介：周凌云（1978—），女，湖南邵陽(yáng)人，助理研究員，博士研究生，主要從事茶樹(shù)病害研究，zhoulingyun0808@3ACT512F：ATGTGCAAGGCCGGTTTCGC，783R：TACGAGTCCTTCTGGCCCAT分別應(yīng)用TIANGEN公司植物基因組DNA抽提試劑盒與真菌基因組DNA試劑盒提取

6、自然發(fā)病葉片的DNA，而對(duì)于Z1、Z2的DNA抽提則采用其真菌基因組DNA試劑盒。以提取的DNA為模板，用3對(duì)引物擴(kuò)增DNA序列，利用寶生物公司pMDTM19T載體進(jìn)行PCR產(chǎn)物的克隆，方法參照pMDTM19T載體說(shuō)明書(shū)。選擇插入片段長(zhǎng)度與克隆片段長(zhǎng)度一致的克隆，送交華大生物公司測(cè)序分析。將測(cè)定所得序列利用Blast程序從GenBank搜索相關(guān)序列，進(jìn)行同源性比較。2結(jié)果與分析2.1明確兩種茶炭疽病癥茶炭疽病主要發(fā)生在茶樹(shù)成葉或老葉上，

7、病斑近圓形或不規(guī)則形，初期水漬狀暗綠色，最后呈紅褐色或灰白色，病斑上生有細(xì)小的黑色粒點(diǎn)，病斑可擴(kuò)大到葉片的12以上，病健分明，見(jiàn)圖1A、1B。圖1A茶炭疽病紅褐色病斑圖1B茶炭疽病灰白色病斑22分離到兩種病原菌100塊紅褐色病樣分離到Z1的幾率為50.00%、Z2為5.12%，100塊灰白色病樣分離到Z1的幾率為73.33%、Z2為3.20%。Z1在PDA上生長(zhǎng)速率平均為1.82cmd菌落顏色逐漸由白色轉(zhuǎn)變?yōu)榛野字敝粱液凇ｏ@微鏡下菌絲體