海洋細菌pseudomonassp.qdaalgl、algg基因的研究

1、特鲞呼U D c研究生學位論文海洋細菌P s e u d o m o n a s s p ．Q D A臼弛、螂基因的研究蹴一蹴名 掛童一姿——荊刪姓名壬立功教授e ¨舯惴剮 砸±々q 愧．蘭一煎堂論文籜辯I j 輯2 壘鰻圭壁且曼一且一學慨授f 日啊2 9 盟生§且中國海洋大學問題。本文建立了一種簡便快捷的甘露糖醛酸c _ 5 差向異構酶活性的測定方法。我們發(fā)現相同分子量的聚甘露糖醛酸和聚古羅糖醛酸與苯酚硫

2、酸試劑反應后顯色程度不同。利用苯酚硫酸法測定了已知結構的褐藻膠片斷的M ／G 比，其結果與傳統(tǒng)的1 H - N F f f l 測定值基本一致。因此，根據甘露糖醛酸爭5 差向異構酶作用前后褐藻膠片段的吸光值差異可以計算甘露糖醛酸c 一5 差向異構酶的活性。此方法簡便有效，特別是對于大規(guī)模的產酶菌株篩選、酶促反應的條件優(yōu)化等實驗是十分適用的。在褐藻膠的生物合成過程中，甘露糖醛酸c _ 5 差向異構酶決定了褐藻膠的M ／G 比，面不同M ／

3、G 比的褐藻膠具有不同的生物活性。因此，甘露糖醛酸C - 5 差向異構酶結構和功能的研究有著重要的意義，近年來已成為本領域研究的熱點。通過基因工程技術改造褐藻膠生產菌株的生物合成途徑，或者直接利用重組酶，就可獲得不同M ／G 比的褐藻膠。本文克隆了P s e u d o m o n a s s p ．Q D A 的甘露糖醛酸c - 5 差向異構酶基因a l g G , 構建了重組表達載體p E T 2 4 a - a l g G ，并轉

4、化宿主Ec o i lB L 2 1 ，構建了生產該酶的工程菌。優(yōu)化后的最佳產酶條件是誘導劑I P T G 終濃度0 ．6 訓，誘導溫度為2 5 “ C ，誘導時間為1 6 小時．粗酶液的活性分析結果表明以多聚甘露糖醛酸或褐藻膠為底物該酶具有較高的活性。在3 0 ℃，反應1 8 小時的條件下，可將底物終濃度為I m g ／m L 的聚甘露糖醛酸3 3 9 6 轉變?yōu)楣帕_糖醛酸。目前，酶的分離純化和性質分析正在進行。關鍵詞：褐藻膠裂解酶甘