靛紅鍵合硅膠液相色譜固定相的制備、表征及應用.pdf

1、中藥是我國的國粹，主要由植物藥(根、莖、葉、果)、動物藥(內臟、皮、骨、器官等)和礦物藥組成。因植物藥占中藥的大多數(shù)，所以中藥也常稱中草藥。中草藥中的有效化學成分作為防病治病的基礎，有著多種藥理功能，目前也得到了廣泛的重視和開發(fā)，但是以中藥的有效成分作為色譜固定相的配體，開發(fā)其色譜功能，這方面的研究不多?；谥兴帪樘烊坏漠a(chǎn)物，其有效成分含天然的結構，存在多種活性基團和作用位點，能與許多物質發(fā)生相互作用，作用力豐富，且原料易得，成本低廉，

2、甚至有抗菌抗病毒等功能，故作為固定相的配體，不僅具有多作用位點的功能，還有助于延長柱子壽命的功能。除分離分析功能外，有望開發(fā)工業(yè)色譜分離材料，用于中草藥活性成分的選擇性富集與分離，減輕常規(guī)溶劑提取法對環(huán)境的污染。所以，天然產(chǎn)物有效成分作為色譜固定相的配體有著廣泛的開發(fā)前景和應用價值，對更深層次地開發(fā)我國寶貴的中草藥資源有著重要的意義。 本學位論文采用中藥有效成分靛紅作為配體，成功地制備了一種新型的色譜固定相--靛紅鍵合硅膠固定相

3、(ISSP)，表征和評價了固定相的結構及其色譜性能，探討其色譜分離機理，并將其應用于中草藥等復雜成分的分離分析中。論文工作主要涉及新固定相的的制備及其色譜功能的研究，主要研究內容如下： 1.從色譜固定相的基質、配體、制備、色譜分離機理及其應用出發(fā)，系統(tǒng)地綜述了近年來國內外高效液相色譜鍵合硅膠固定相的研究進展，展望了中草藥活性成分作為色譜固定相的配體在分離科學中的應用前景，并以此作為本論文選題的依據(jù)。 2.采用固液相表面連

4、續(xù)反應法，以硅膠為基質，γ-[(2，3)-環(huán)氧丙氧]丙基三甲氧基硅烷(KH-560)為偶聯(lián)劑，靛紅作為配體，三乙胺和高氯酸作為催化劑，在溫和的條件下，首次制備了靛紅鍵合硅膠固定相(ISSP)。該固定相為棕紅色固體，采用紅外光譜法、熱重分析法和元素分析法對其結構進行表征。結果表明，靛紅被成功地鍵合到硅膠表面上，并測得每克硅膠的鍵合量為0.294mmol，且該固定相具有良好的熱穩(wěn)定性。 3.以聯(lián)苯為溶質探針，在甲醇-水為流動相(50

5、:50，v/v，0.8 mLmin-1，29℃)的條件下，測得ISSP的理論塔板數(shù)為18680塊/米，且在有機溶劑和酸性流動相的長時間沖洗下，其保留時間和柱效變化很小，說明ISSP色譜柱鍵合層較穩(wěn)定。采用目前較為通用的Kimata提出的有關反相鍵合固定相的評價方法，較系統(tǒng)地評價ISSP的基本色譜性能，包括疏水能力、氫鍵能力、立體選擇能力和離子交換能力等。結果表明，所制備的新固定相具有良好的疏水性反相色譜特性，擁有較強的氫鍵能力、較高的立

6、體選擇性和適中的離子交換能力。再以稠環(huán)芳烴和中性、酸性、堿性的混合物為溶質探針，探討新固定相對不同類型化合物的色譜分離機理和特點。結果表明，ISSP除疏水性外，還能與溶質間能發(fā)生氫鍵作用、π-π或n-π電荷轉移作用以及偶極-偶極作用，多種作用力的共同作用使得ISSP能夠克服ODS單一疏水作用機理的不足。實驗還以吡啶、苯胺、鄰甲苯胺三種堿性小分子為溶質，考察固定相的親硅醇基效應，結果表明，新固定相的配體和鍵合臂有利于抑制親硅醇基效應。

7、 4.用ISSP分離部分含氮堿基和水溶性維生素，研究了溶質在新固定相上的色譜行為及各種因素對色譜分離的影響，并優(yōu)化色譜條件，為進一步的應用奠定基礎。結果表明，上述溶質在ISSP上的分離效果明顯優(yōu)于ODS，這是因為ISSP與溶質之間存在氫鍵作用、π-π電荷轉移作用、偶極-偶極作用和靜電作用等，對極性溶質有較好的分離選擇性；另外，由于其疏水性弱于ODS，故對脂溶性成分保留適度，有利于快速分離和提高柱效，一定程度上說，其等度洗脫有望部分代

8、替ODS梯度洗脫模式，對復雜體系的分離具有較好的應用前景。 5.黃酮類化合物是一類具有廣泛藥用價值的中草藥有效成分。在上述色譜性能的評價基礎上，將ISSP用于分離6種常見的黃酮類化合物，從固定相及溶質結構的角度，考察新固定相色譜保留機理和對黃酮類化合物的分離能力，同時，也將ISSP應用于中草藥葛根和中成藥金膽片提取液等的分離分析，初步考察其對復雜樣品的色譜分離能力。結果表明，ISSP對中草藥中的黃酮類等含有多種取代基的極性化合物