自噬在酒精致PC12細胞損傷中的保護作用.pdf

1、自噬是廣泛存在于真核細胞中的生命現(xiàn)象，是真核細胞內降解胞質細胞器和長壽命蛋白質的一種溶酶體途徑。它是一個貫穿大分子、核糖體和細胞器被降解過程中高度保守的機制。自噬通常被認為是在饑餓情況下為細胞提供了暫時生存的機會，這些情況包括氨基酸和營養(yǎng)物的缺失、缺氧和代謝應激。程序性細胞死亡是區(qū)別去細胞壞死的一種細胞死亡方式，分為Ⅰ型即凋亡性細胞死亡和Ⅱ型即自噬性細胞死亡。有研究表明，自噬作為一種程序性細胞死亡的方式，在某些情況下，如凋亡阻斷，可能將

2、細胞帶至最終的死亡。酒精是一種親神經(jīng)物質，對人體許多系統(tǒng)、器官均有損傷作用，其中神經(jīng)系統(tǒng)是其損傷的主要靶器官之一。酒精的神經(jīng)毒性作用主要表現(xiàn)在氧化損傷、改變細胞質膜的狀態(tài)、引起細胞凋亡等幾個方面。目前國內外對酒精致神經(jīng)細胞損傷在自噬性死亡方面的研究尚為鮮見。
　　 目的：本文以大鼠嗜鉻神經(jīng)瘤細胞PC12為靶細胞，并將PC12細胞分為四組：正常對照組、酒精處理組、酒精+自噬抑制劑處理組、酒精+凋亡抑制劑處理組。以探討自噬在酒精致P

3、C12細胞損傷過程中的保護作用，為揭示酒精的神經(jīng)毒性作用的進一步研究提供實驗依據(jù)，也為酒精致神經(jīng)細胞損傷的修復提供理論依據(jù)。
　　 方法：構建重組pEGFP-LC3表達載體，并瞬時轉染PC12細胞，以鑒定酒精致PC12細胞損傷過程中自噬的發(fā)生；MTT法檢測自噬在酒精抑制PC12細胞增殖過程中所起的作用；通過高內涵活細胞成像系統(tǒng)測定活性氧水平來檢測自噬在酒精致PC12細胞氧化損傷作用中所起的作用；通過免疫熒光、高內涵活細胞成像系統(tǒng)

4、、Western blot檢測酒精致PC12細胞損傷過程中，自噬與凋亡的相互關系。
　　 結果：(1)在酒精致PC12細胞損傷過程中有自噬的發(fā)生；(2)在酒精致PC12細胞損傷過程中，抑制自噬會導致細胞生存率明顯下降，同時細胞的氧化損傷水平顯著升高；(3)在酒精致PC12細胞損傷過程中，抑制自噬，細胞Caspase介導的凋亡水平升高，抑制Caspase介導的凋亡，的自噬水平升高。
　　 結論：(1)酒精致PC12細胞損傷