癌相關成纖維細胞促進唾液腺腺樣囊性癌侵襲及其機制研究.pdf

1、目的:唾液腺腺樣囊性癌(Salivary gland adenoid cystic carcinoma，ACC)侵襲性強，易發(fā)生遠處轉移。本研究的目的為探究體外條件下ACC來源的癌相關成纖維細胞（cancer associated fibroblasts，CAF）的生物學特性，及其對ACC細胞侵襲的影響。
　　方法:本研究通過HE染色方法，對兩例ACC組織進行病理診斷;免疫組織化學染色的方法檢測ACC組織間質中α-平滑肌肌動蛋白(

2、α-Smooth muscle actin，α-SMA)的表達情況。對這兩個新鮮ACC組織中提取的原代細胞進行培養(yǎng)和純化，并通過細胞免疫熒光染色的方法檢測原代細胞中廣譜細胞角蛋白(pan-cytokeratin，CK)、波形蛋白(vimentin，VIM)、α-SMA、成纖維細胞活化蛋白(fibroblast activatedprotein，F(xiàn)AP)、成纖維特異性蛋白1（fibroblast specific protein1，F(xiàn)SP

3、-1）的表達情況。細胞劃痕實驗考察CAF細胞的遷移能力。Transwell小室細胞侵襲實驗模型和微流控芯片模型考察CAF的侵襲能力。收集CAF的條件培養(yǎng)液(conditionalmedium，CM)，通過細胞劃痕實驗和Transwell小室細胞侵襲實驗考察CAF對ACC細胞遷移和侵襲能力的影響。通過微流控芯片模型，研究ACC細胞與CAF侵襲時的相互作用關系。通過抑制基質金屬蛋白酶和干擾CXCL12/CXC R4信號通路來考查CAF對AC

4、C侵襲的抑制作用。
　　結果:觀察HE染色切片，兩例病例組織均為ACC，免疫組織化學染色結果表明α-SMA在ACC組織的間質中表達陽性。細胞免疫熒光染色方法鑒定從ACC組織中提取的原代CAF，結果顯示這些細胞CK表達陰性，VIM表達陽性，幾乎所有的細胞都表達FAP和FSP-1，大部分細胞表達α-SMA，提示我們提取這些原代細胞表達典型的CAF生物學標記物。傳統(tǒng)的細胞劃痕實驗、Transwell小室細胞遷移實驗以及Transwell

5、小室細胞侵襲實驗均顯示CAF與正常牙齦成纖維細胞相比，其遷移能力和在垂直方向上的侵襲能力更強;微流控芯片的實驗結果表明CAF在水平方向上也具有較強的侵襲能力。并且，與空白對照組相比較，CAF可以促進ACC細胞系SACC-LM和SACC-83細胞的遷移、侵襲。將SACC-LM和SACC-83細胞與CAF在微流控芯片平臺上共培養(yǎng)，我們發(fā)現(xiàn)CAF總是位于侵襲通道的前沿，SACC-LM和SACC-83細胞沿著CAF在基質膠中建立的侵襲通道向前移

6、動。而SACC-LM和SACC-83細胞與正常牙齦成纖維細胞共培養(yǎng)時，SACC-LM和SACC-83細胞位于侵襲的前沿。經過統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)，SACC-LM和SACC-83細胞與CAF共培養(yǎng)時，ACC細胞侵襲到基質膠中的面積更大，差別具有統(tǒng)計學意義。CAF促進ACC侵襲的抑制實驗顯示，GM6001完全抑制ACC和CAF細胞侵襲入基質膠內;AMD3100可以抑制SACC-LM和SACC-83細胞的侵襲，特別是SACC-LM和SACC-83沒