多重耐藥鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素耐藥機制及同源性研究.pdf

1、研究目的:
　　1.明確我院臨床分離的鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素的敏感性和對其他常用抗生素的耐藥現(xiàn)狀。
　　2.揭示鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素敏感性下降的可能機制。
　　3.了解我院臨床分離的鮑曼不動桿菌的同源性情況。
　　研究方法:
　　收集我院2012年1月至2012年12月臨床分離的74株非重復鮑曼不動桿菌，其中64株對替加環(huán)素不敏感（tigecycline non-susceptible A.baumann

2、ii，TNAB），10株對替加環(huán)素敏感（tigecycline susceptible A.baumannii，TSAB）。
　　1.應用瓊脂稀釋法測定74株鮑曼不動桿菌對18種常用抗生素的最小抑菌濃度（Minimal inhibitory concentration，MIC），應用肉湯微量稀釋法測定74株鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素的MIC。
　　2.應用PCR擴增技術對主要外排泵基因(adeABC、adeIJK、adeFGH、

3、abeM、adeSR及adeDE)、tetX及tetX1基因進行篩選。
　　3.應用實時熒光定量聚合酶鏈反應(real-time PCR)技術測定adeB、adeJ、adeG和abeM基因的表達情況。
　　4.應用外排泵抑制劑羰基氰氯苯腙(carbonyl cyanide3-chlorophenylhydrazone， CCCP)、苯丙氨酰-精氨酸-β-苯胺(phenyl-arginin-β-naphthylamide，PA

4、βN)、N-甲基吡咯烷酮[1-(1-naphthylmethyl)-piperazine，NMP]、利血平和維拉帕米對替加環(huán)素的外排泵進行抑制試驗。
　　5.應用多位點序列分型（Multilocus sequence typing，MLST）技術和脈沖場凝膠電泳(Pulsed-field gel electrophoresis，PFGE)技術了解鮑曼不動桿菌的分子流行病學情況。
　　6.對感染有多重耐藥鮑曼不動桿菌的TNAB

5、和TSAB兩組患者基本情況進行回顧性分析。
　　研究結果:
　　1.74株非重復菌均為多重耐藥鮑曼不動桿菌，仍保持較高敏感性的抗生素為多粘菌素。
　　2.大部分菌株同時攜帶有adeABC、adeIJK、adeFGH和abeM外排泵基因，1株TSAB菌株同時攜帶有adeABC和adeDE基因，12株(18.8％) TNAB菌株攜帶有tetX1基因。
　　3.相比TSAB組菌株，TNAB組菌株的adeB、adeJ、

6、adeG和abeM基因的平均表達水平分別高了29、3、0.7和1倍。
　　4.外排泵抑制劑CCCP和PAβN可提高部分多重耐藥鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素的敏感性，維拉帕米可降低部分多重耐藥鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素的敏感性，利血平和NMP沒有明顯作用。
　　5.MLST技術將74株鮑曼不動桿菌分成了18個序列型（Sequence type，ST），包括8個新的ST型，其中ST208和ST191是最主要的ST型，屬于克隆復合體(Clo

7、nalcomplex，CC)92。用PFGE技術分成了19個脈沖型。
　　6.TNAB組患者和TSAB組患者除了最后一個月使用的碳青霉烯類抗生素有明顯的差異外，其他各項基本情況無明顯差異。
　　研究結論:
　　1.目前我院臨床分離的鮑曼不動桿菌多為多重耐藥株，因此，合理規(guī)范使用抗生素在我院是十分必要的。
　　2.鮑曼不動桿菌能夠通過高表達的AdeABC外排泵系統(tǒng)降低對替加環(huán)素的敏感性，有必要監(jiān)測鮑曼不動桿菌對替加