阿托伐他汀預處理對缺血再灌注心肌線粒體功能的保護機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　第1部分 缺血再灌注損傷動物模型的建立及單次負荷劑量阿托伐他汀鈣預處理的保護作用
　　目的:
　　建立在體SD大鼠缺血再灌注模型，觀察阿托伐他汀預處理對再灌注心肌的保護作用，觀察氯尼達明對阿托伐他汀保護作用的影響。
　　方法:
　　1、缺血再灌注（Ischemia-reperfusion，I/R）動物模型制作:選擇SD大鼠按照如下方法制作I/R模型:全麻下暴露心臟，離前降

2、支起點約2-3 mm處用5-0絲線結(jié)扎前降支，阻斷30分鐘后松開再灌注120分鐘。
　　2、動物分組:選擇SD大鼠20只，隨機分為4組，每組5只:(1)假手術(shù)組（sham組）:前降支只穿線，不結(jié)扎。(2)缺血再灌注損傷組（I/R組）:標準I/R動物模型操作。(3)阿托伐他汀預處理組(Ator組):I/R操作前12h用阿托伐他汀80 mg/kg灌胃，然后進行I/R操作。(4)阿托伐他汀預處理+氯尼達明組（Ator+LND組）:I/R

3、操作前12h用阿托伐他汀80 mg/kg灌胃，I/R操作前12h用阿托伐他汀80 mg/kg灌胃，然后進行I/R操作，松開結(jié)扎線前10分鐘經(jīng)腹腔注射氯尼達明(50mg/kg)。
　　3、觀察指標:記錄實驗動物的體重和左室重量，全程記錄大鼠心率、心律變化。采用Evans Blue和TTC法檢測缺血再灌注心肌缺血危險區(qū)和梗死區(qū)面積，用透射電鏡觀察再灌注心肌的超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　4、統(tǒng)計學方法:將數(shù)據(jù)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進

4、行統(tǒng)計學分析。計量資料采用(x)±s表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，先用Levene法進行方差齊性檢驗，若方差齊則采用LSD法行組間比較，若方差不齊采用Tamhane方法行組間比較。組間率的比較使用卡方檢驗。假設(shè)P＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1、基線資料比較:各組SD大鼠的體重分別Sham組244.08±8.81 g、I/R組243.92±10.41 g、Ator組246.69±8.23g、Ator

5、+LND組247.62±8.14g，組間比較差異無顯著統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。缺血再灌注后各組左心室的重量分別為0.408±0.004g、0.405±0.008g、Ator:0.408±0.006g、Ator+LND:0.409±0.006g，各組間比較差異無顯著統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2、造模過程中的心律失常發(fā)生率:與Sham組相比，I/R組再灌注心律失常發(fā)生率顯著升高(Sham vs I/R:7.7％ vs46.

6、2％，P=0.027)，Ator組、Ator+LND組心律失常發(fā)生率升高，但未達統(tǒng)計學差異(Sham vs Ator:7.7％ vs23.1％，P=0.277; Sham vs Ator+LND:7.7％ vs38.5％,P=0.063)。Ator組(23.1％)、Ator+LND組(38.5％)再灌注后心律失常發(fā)生率低于I/R組(46.2％)，但未達統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　3、用缺血危險區(qū)面積/左室面積(area at

7、 risk/left ventricular，AAT/LV)表示心肌缺血面積比，用梗塞面積/缺血危險區(qū)面積(Infarct area/area atrisk，IA/AAR)表示梗死面積比。與I/R組相比，Ator組、Ator+LND組的AAR/LV顯著減少，具有統(tǒng)計學差異。
　　4、透射電鏡觀察各組超微結(jié)構(gòu)變化發(fā)現(xiàn)，I/R組胞質(zhì)稀疏，分布不均，可見明顯水腫。線粒體膜完整性破壞，局部有空泡，嵴斷裂，排列紊亂，局部結(jié)構(gòu)消失。Ator組

8、線粒體表達豐富，結(jié)構(gòu)相對完整，可見輕度水腫，嵴突數(shù)目略有減少、排列欠整齊，可見少許空泡、線粒體破裂現(xiàn)象。
　　結(jié)論:
　　1、在體大鼠I/R模型建立成功，在缺血再灌注建模前12h阿托伐他汀(80mg/kg)灌胃可以減少I/R損傷程度，氯尼達明部份抵消阿托伐他汀的心肌保護作用，
　　2、阿托伐他汀預處理可以減少I/R損傷性心律失常的發(fā)生率。
　　3、阿托伐他汀預處理可以減輕I/R心肌細胞線粒體超微結(jié)構(gòu)損傷。

9、　　第2部分 阿托伐他汀鈣預處理對大鼠缺血再灌注心肌UCP3表達和線粒體功能的影響
　　目的:
　　探討阿托伐他汀預處理對I/R心肌UCP3表達的影響，觀察阿托伐他汀對I/R心肌線粒體功能的保護作用，以及氯尼達明對UCP3和線粒體功能的影響。
　　方法:
　　選擇SD大鼠32只，隨機分為4組（sham組、I/R組、Ator組、Ator+LND組），每組8只，建立在體I/R模型（操作如第一部分）。在再灌注2h后，立

10、即留取心臟標本，用RT-PCR法檢測心肌UCP3基因轉(zhuǎn)錄水平，Western blot法檢測心肌UCP3蛋白表達水平，檢測心肌組織三磷酸腺苷(adenosine5' triphosphate，ATP)含量。留取血標本檢測乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase，LDH)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(SuperOxide Dismutase，SOD)、游離脂肪酸(Free fat acid

11、，F(xiàn)FA)的含量。比較各組各個指標之間的區(qū)別。
　　使用Graphpad Prism及SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料用(x)±s表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，若方差齊應用LSD法進行組間比較，方差不齊則采用Tamhane方法進行組間比較，P＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1、各組UCP3基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白含量的比較
　　與Sham組相比，I/R組、Ator組、Ator+LN

12、D組UCP3基因表達水平顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(Sham vs I/R:1.02±0.17 vs1.42±0.21, P=0.003; Shamvs Ator:1.02±0.17 vs1.94±0.31, P＜0.001; Sham vs Ator+LND:1.02±0.17 vs1.70±0.28, P＜0.001); I/R組、Ator組、Ator+LND組UCP3蛋白含量顯著升高，有統(tǒng)計學意義(Sham vs I/R:0.28

13、6±0.086 vs0.420±0.092, P=0.005; Sham vs Ator:0.286±0.086 vs0.584±0.099, P＜0.001; Sham vs Ator+LND:0.286±0.08 vs0.549±0.068, P＜0.001）。
　　2、各組LDH活性的比較
　　與Sham組相比，I/R組、Ator組、Ator+LND組LDH活性均顯著升高，有統(tǒng)計學意義(Sham vs I/R:392.

14、59±55.56 vs3864.15±162.92U/L, P＜0.001;Shamvs Ator:392.59±55.56 vs3056.17±136.22 U/L, P＜0.001; Sham vs Ator+LND:392.59±55.56 vs3578.01±239.41 U/L, P＜0.001)。
　　3、各組血漿SOD活力的比較
　　與Sham組相比，I/R組、Ator組、Ator+LND組SOD活力明顯降低，

15、具有統(tǒng)計學意義(Sham vs I/R:178.80±7.03 vs121.17±7.09 U/ml, P＜0.001; Sham vsAtor:178.80±7.03 vs159.53±8.64 U/ml, P＜0.001; Sham vsAtor+LND:178.80±7.03 vs143.27±6.15 U/ml, P＜0.001)。
　　4、各組血漿MDA組間比較
　　與Sham組相比，I/R組、Ator組、Ator

16、+LND組MDA含量明顯升高，具有統(tǒng)計學意義(Sham vs I/R:2.56±0.58 vs5.02±0.72nmol/ml, P＜0.001; Sham vsAtor:2.56±0.58 vs3.49±0.40nmol/ml, P=0.002; Sham vs Ator+LND:2.56±0.58vs4.45±0.47 nmol/ml, P＜0.001)。
　　結(jié)論:
　　1、缺血再灌注使UCP3基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達水

17、平升高。阿托伐他汀預處理進一步上調(diào)了UCP3基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達水平。氯尼達明可部分抑制阿托伐他汀上調(diào)UCP3表達的作用。
　　2、阿托伐他汀預處理可以減輕心肌的I/R損傷，其機制可能與其減輕脂質(zhì)過氧化損傷、增強心肌清除自由基的能力以及提高線粒體的ATP保有量有關(guān);而氯尼達明可削弱阿托伐他汀的上述作用。
　　3、阿托伐他汀對UCP3的調(diào)節(jié)可能與血漿FFA的代謝無關(guān)。
　　總結(jié):
　　缺血再灌注加重了心肌損傷，阿托伐