紅稗花青素提純、鑒別及生物活性研究.pdf

1、本論文以紅稗為原料，使用超聲波輔助技術(shù)提取花青素，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)，優(yōu)化紅稗花青素提取工藝。選用大孔吸附樹脂對(duì)紅稗花青素進(jìn)行純化，以六種植物中常見(jiàn)花青素為對(duì)照，使用高效液相色譜法測(cè)定紅稗花青素的種類和含量，研究了高效液相色譜法測(cè)定紅稗花青素的的線性關(guān)系、精密度及加標(biāo)回收率。使用微弱發(fā)光儀測(cè)定紅稗花青素提取物的超氧陰離子、過(guò)氧化氫、羥自由基清除率以及DNA損傷保護(hù)活性，并進(jìn)行了DPPH的清除作用和抑菌活性試驗(yàn)。主要研究

2、結(jié)果如下：
　　（1）單因素試驗(yàn)表明，料液比為1:30 g/mL，鹽酸濃度為3 mol/L，乙醇體積比為3:1，提取時(shí)間為15 min，提取功率為200 W時(shí)，紅稗花青素提取效果最好。
　　在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，響應(yīng)面試驗(yàn)表明，紅稗花青素最佳提取條件：料液比為1:32 g/mL，鹽酸濃度為2.6 mol/L,乙醇體積比為4.6:1，提取時(shí)間為16 min。在此條件下進(jìn)行3次驗(yàn)證性試驗(yàn)，紅稗花青素提取率為7.18％，與理論預(yù)測(cè)值

3、(7.26%)較為接近，說(shuō)明模型的擬合程度較好，所擬合的回歸方程對(duì)紅稗花青素提取工藝進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)是可靠的。
　?。?）通過(guò)靜態(tài)吸附和解吸研究，得出S-8型大孔樹脂吸附時(shí)間為0.5 h～1.0 h，解吸時(shí)間以3.0 h～4.0 h為宜。當(dāng)吸附和解吸基本達(dá)到平衡時(shí)，吸附率為92.17%，解吸率為87.23%。與其它6種大孔樹脂對(duì)比，其吸附率大，解吸率高，吸附和解吸時(shí)間均較短，適合純化紅稗花青素。
　　大孔樹脂靜態(tài)解吸試驗(yàn)表明，

4、pH為1.0，乙醇濃度為70%時(shí)，靜態(tài)解吸效果最好。動(dòng)態(tài)試驗(yàn)表明，進(jìn)樣速率為1.0 mL/min，進(jìn)樣濃度為2.00 mg/mL時(shí)，動(dòng)態(tài)吸附效果最好，洗脫流速為1.0 mL/min時(shí)，動(dòng)態(tài)解吸效果最好。
　?。?）使用高效液相色譜法測(cè)定紅稗花青素種類和含量，6種花青素標(biāo)準(zhǔn)品飛燕草色素、矢車菊色素、矮牽牛色素、天竺葵色素、芍藥色素、錦葵色素出峰時(shí)間依次為8.585、9.986、10.252、11.832、12.464和12.697

5、min。出峰時(shí)間均在7～20 min以內(nèi)，基線基本分離。紅稗花青素主要為矢車菊色素和天竺葵色素，含量分別為689 mg/kg和80 mg/kg。高效液相色譜法測(cè)定花青素，線性關(guān)系良好，具有較高的精密度和加標(biāo)回收率，說(shuō)明其是一種有效的定量分析方法。
　?。?）抗氧化和DNA損傷保護(hù)活性試驗(yàn)表明，隨著樣品濃度的升高，清除率上升，呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。在鄰苯三酚-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系中，當(dāng)質(zhì)量濃度為12.5 mg/mL時(shí)，對(duì)超氧陰離子自由基的

6、清除率為46.45%，其IC50值為15.37 mg/mL；在魯米諾-過(guò)氧化氫化學(xué)發(fā)光體系中，質(zhì)量濃度為10μg/mL時(shí)，對(duì)過(guò)氧化氫的清除率為50.05%，IC50為8.14μg/mL；在硫酸亞鐵-魯米諾-過(guò)氧化氫化學(xué)發(fā)光體系中，當(dāng)濃度為1000μg/mL時(shí)，對(duì)羥基自由基的清除率達(dá)到96.78%，IC50為88.89μg/mL。在CuSO4-Phen-VC-H2O2-DNA化學(xué)發(fā)光體系中，對(duì)DNA損傷的半抑制濃度IC50值為0.85 m