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文檔簡介
1、目的:檢測GnRHR在胃癌組織中的表達情況,分析其與胃癌患者預后的相關(guān)性,探討GnRHR在胃癌發(fā)生發(fā)展、分化及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)分子機制。
方法:應用RT-PCR方法檢測48例術(shù)前未接受任何治療的胃癌患者病理標本中腫瘤和腫瘤旁組織內(nèi)促性腺激素釋放激素受體(GnRHR)mRNA的表達;免疫組化分析腫瘤組織及腫瘤旁組織中GnRHR蛋白的表達。通過卡方檢驗分析GnRHR表達與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)的相關(guān)性,
2、采用Kaplan–Meier和秩檢驗進行生存分析,探討GnRHR表達對胃癌患者預后的影響。按腫瘤分化程度將48例胃癌患者腫瘤組織標本分為分化差、分化良好兩組,應用免疫組織化SP及原位定量法,對48例不同分化程度的胃癌組織中GnRHR、表皮生長因子受體(EGFR)的表達進行檢測及半定量分析。Western blot檢測三種不同分化程度胃癌細胞中GnRHR表達情況;采用不同濃度(1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×
3、10-6mol/l)GnRH激動劑醋酸曲普瑞林作用于三種不同分化程度的胃癌細胞株,MTT實驗觀察其對胃癌細胞增殖的影響。Western blot檢測GnRHR及分化相關(guān)蛋白表達情況。采用transwell小室檢測GnRH激動劑醋酸曲普瑞林激活胃癌細胞GnRHR后細胞侵襲和遷移能力;Western blot檢測GnRHR激活后胃癌細胞EMT相關(guān)蛋白E-cad、vimentin及snail的表達情況。采用酪氨酸磷酸酶抑制劑正釩酸鈉激活EGF
4、R磷酸化后MTT檢測細胞增殖情況、western blot檢測細胞增殖分化相關(guān)蛋白及EMT相關(guān)蛋白表達情況。
結(jié)果:為了研究GnRHR在胃癌中的作用,我們通過RT-PCR及免疫組化分別檢測48例胃癌組織及相應的癌旁組織中GnRHR mRNA及GnRHR蛋白表達,結(jié)果顯示GnRHR mRNA在胃癌組織中表達明顯高于癌旁組織(-10.06±1.28 vs-12.43±1.33,p<0.05)。GnRHR蛋白主要定位在細胞漿,在48
5、例胃癌患者中,超過一半胃癌組織中GnRHR染色陰性(52.08%,25/48)。為了探討GnRHR與胃癌患者臨床參數(shù)及預后的相關(guān)性,我們收集48例胃癌患者臨床及隨訪資料,采用統(tǒng)計學軟件分析發(fā)現(xiàn):GnRHR mRNA表達與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移以及TNM分期有關(guān);GnRHR mRNA表達與患者總生存率相關(guān),并且GnRHR mRNA低表達(-ΔCt<-10.06)患者總生存率較差(p=0.003;HR=0.42,95%CI:0.22-0.
6、87)。按腫瘤分化程度將48例胃癌患者腫瘤組織標本分為分化差、分化良好兩組,各種不同分化的癌組織均顯示不同程度的 GnRHR和EGFR陽性免疫反應,GnRHR表達陽性23例(47.92%),EGFR表達陽性26例(54.16%),原位定量顯示GnRHR的表達分化良好20例、分化差3例,隨著組織分化程度增高而增高,EGFR的表達分化良好13例、分化差13例,隨著組織分化程度增高而降低(P<0.05)。相關(guān)性分析顯示:不同分化程度胃癌組織中
7、GnRHR與EGFR表達成負相關(guān)并具有統(tǒng)計學意義;為了進一步探討 GnRHR與 EGFR的相關(guān)性以及GnRHR在胃癌的發(fā)生發(fā)展、分化及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)分子機制,我們通過細胞學實驗從細胞增殖、細胞分化、細胞侵襲轉(zhuǎn)移三方面進行研究。
結(jié)果顯示:不同濃度醋酸曲普瑞林作用胃癌細胞不同時間抑制胃癌細胞增殖,western blot結(jié)果顯示GnRHR通過EGFR-ERK通路抑制胃癌細胞增殖;此外,GnRHR在不同分化程度胃癌細胞中表
8、達不同,分化程度越高,GnRHR表達越高,進一步western blot結(jié)果顯示GnRHR通過EGFR-CDK1通路調(diào)控胃癌細胞分化;胃癌組織中GnRHR與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān),為了從細胞水平研究GnRHR對胃癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響,采用醋酸曲普瑞林誘導GnRHR表達后transwell小室檢測胃癌細胞遷移及侵襲能力,結(jié)果顯示:醋酸曲普瑞林作用于胃癌細胞后,透膜細胞數(shù)明顯減少。提示誘導GnRHR表達抑制胃癌細胞遷移及侵襲能力。進一步western
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