鎘脅迫下東南景天（Sedum alfredii Hance）中差異表達(dá)cDNA篩選.pdf

1、　　轉(zhuǎn)基因植物修復(fù)技術(shù)已經(jīng)成為當(dāng)前重金屬植物修復(fù)技術(shù)中的一個(gè)重要策略。但由于重金屬耐受及富集相關(guān)基因資源的缺乏、對(duì)植物富集耐受重金屬的分子機(jī)制及生理基礎(chǔ)還缺乏詳細(xì)全面的理解，限制了基因工程技術(shù)在植物修復(fù)上的應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)從東南景天(SedumalfrediiHance)葉片中分離Cd誘導(dǎo)表達(dá)的cDNA片段，擬找出耐受及富集鎘相關(guān)基因，以期從分子水平上為闡述東南景天耐受或富集鎘的機(jī)制提供一定理論依據(jù)。　　本論文選取鋅/鎘超富集植物東南景天

2、為研究材料，以100μMCdC處理12h、24h和48h的東南景天葉片混合mRNA為檢測(cè)子(Tester)，200μMKCl作相同時(shí)間處理的東南景天葉片混合mRNA為驅(qū)趕子(Driver)，采用抑制消減雜交技術(shù)(suppressionsubtractivehybridization，SSH)，以pGEM(R)-TEasy為載體轉(zhuǎn)化JM109細(xì)胞構(gòu)建了Cd脅迫下東南景天中差異表達(dá)cDNA文庫(kù)。從文庫(kù)中隨機(jī)挑取58個(gè)克隆測(cè)序后獲得29個(gè)片段

3、大小為132～583bp的獨(dú)立cDNA片段。對(duì)這29個(gè)cDNA片段的序列進(jìn)行相似性分析發(fā)現(xiàn)，其中有7個(gè)cDNA片段與已報(bào)道的脅迫相關(guān)的功能基因相似性較高(79％～90％)。它們分別是與環(huán)境脅迫信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的S-受體蛋白激酶基因、LRR-受體蛋白激酶基因和Shaggy-相關(guān)的蛋白激酶基因；與重金屬解毒相關(guān)的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶基因、醌氧化還原酶基因、醇脫氫酶基因；及調(diào)控轉(zhuǎn)錄相關(guān)的類基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄因子?！　∩鲜鼋Y(jié)果表明，東南景天在Cd脅迫下，可能