西格列汀對高糖誘導的腎小管上皮細胞Wnt-β-catenin信號途徑及轉分化影響的研究.pdf

1、目的：
　　探討Wnt/β-catenin信號途徑在高糖誘導的腎小管上皮細胞轉分化中的作用及西格列汀的干預作用。
　　方法：
　　取大鼠腎近端小管的上皮細胞（NRK-52E），取用低糖DMEM+10％胎牛血清培養(yǎng)基，在37℃，5%CO2條件下生長，等待細胞長到大約80%融合時，換到無胎牛血清的培養(yǎng)基培育24小時，讓細胞能夠同步生長，之后把這些細胞分組如下：
　　(1)正常對照組：葡萄糖5.5mmol/L；

2、　?。?）高糖組：葡萄糖25mmol/L；
　?。?）高滲組：甘露醇19.5mmol/L+葡萄糖5.5mmol/L；
　　（4）西格列汀干預組：西格列汀10umol/L+葡萄糖25mmol/L；
　?。?）XAV939組，用Wnt/β-catenin通路抑制劑XAV939(1umol/L)預處理細胞40min，然后加入25mmol/L的葡萄糖；48h后聚齊各組細胞，用Western blot法測驗Wnt4、β-cate

3、nin、α-SMA蛋白表達的程度。用Real time-PCR法檢測Wnt4、β-catenin、α-SMA等基因的表達。
　　結果：
　　1.細胞毒性實驗：隨著西格列汀濃度的上升，細胞凋亡率也逐步升高。依照試驗結果和有關參考文獻，此次實驗中采用10umol/l的西格列汀濃度。
　　2.實時熒光定量PCR結果：48小時后，高滲組腎小管上皮細胞中Wnt4、β-catenin、α-SMA的mRNA表達程度和正常對照組并無明

4、顯差別（P＞0.05）；高糖組腎小管上皮細胞中Wn4t、β-catenin、α-SMA的mRNA表達水平與其他組相比有明顯增加，差別存在統(tǒng)計學意義（P<0.05）；西格列汀組與Wnt阻斷劑組腎小管上皮細胞中Wnt4、β-catenin、α-SMA的mRNA表達程度相比高糖組明顯降低，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05），當中Wnt阻斷劑組降低更為明顯。
　　3.Western blot組：48小時之后，高滲組腎小管上皮細胞中Wnt4、

5、β-catenin、α-SMA的表達與正常對照組并無顯著差別（P＞0.05）；高糖組腎小管上皮細胞中Wnt4、β-catenin、α-SMA的表達和其他組對比有顯著增長，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；西格列汀組與Wnt阻斷劑組腎小管上皮細胞中Wnt4、β-catenin、α-SMA的表達比高糖組明顯降低，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05），當中Wnt阻斷劑組降低要更為明顯。
　　結論：
　　西格列汀可以通過部分抑制Wnt/