大豆皂甙的提取、分離及酶解.pdf

1、大連理工大學(xué)博士學(xué)位論文大豆皂甙的提取、分離及酶解姓名：田晶申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化工指導(dǎo)教師：蘇志國;金鳳燮20010101大連理工大學(xué)博士學(xué)位論文佳時(shí)間為1 2 h ，最佳p } { 值為5 。上述三種酶液均能水解皂甙變成低糖皂甙產(chǎn)物及甙元。s p ．4 8 S 菌所產(chǎn)酶液與B 組大豆皂甙反應(yīng)，所得產(chǎn)物的分子量為6 6 8和7 8 0 ，是B 組大豆皂甙單體被水解后的低糖大豆皂甙，分子式為c ，e H ?o ·2 k

2、 l t 0和c 。H ?0 。。其中，分子量為6 6 8 的大豆皂甙是3 一氧一[ D —D 一吡喃葡萄糖醛酸基]大豆甙元B 帶兩個(gè)結(jié)晶水，是B 組大豆皂甙水解掉一個(gè)和兩個(gè)糖基的產(chǎn)物；分子量為7 8 0 的大豆皂甙，是3 一氧一k —L —n L L P 南鼠李糖基( 1 - - ) 2 ) B —D 一毗喃葡萄糖醛酸基] 大豆甙元B ，是B 組大豆皂甙I I 水解掉一個(gè)a —L - P [ ±喃阿拉伯糖基的產(chǎn)物。s p ．

3、4 8 s 和s p ．8 4 8 s 菌產(chǎn)酶的最佳培養(yǎng)時(shí)間為4 8 h ；s p ．3 9 s 菌產(chǎn)酶的最佳培養(yǎng)時(shí)間為3 6 h 。 對(duì)s p ．4 8 s 、s p ．8 4 8 s 和s p ．3 9 s 菌所產(chǎn)的1 3 一葡萄糖苷酶進(jìn)行分離提純的研究表明，利用高效液相制備色譜可以分離提純混合酶液。其中，s p ．4 8 s 和s p ．8 4 8 S 菌所產(chǎn)1 3 一葡萄糖苷酶均在4 0 ％左右的鈉鹽濃度下被洗脫下來，收率分別為

4、3 ．O ％和3 ．6 ％；s p ．3 9 s 菌所產(chǎn)0 一葡萄糖苷酶在3 3 ％的鈉鹽濃度下被洗脫下來，收率為3 ．1 ％。對(duì)于s p ．4 8 S 和s p ．8 4 8 s 菌所產(chǎn)1 3 一葡萄糖苷酶，酶反應(yīng)最適p H 均為5 ．0 ，最適溫度均為4 0 ℃，均在p H 3 ．O - p H 7 ．0 和3 0 ℃一6 0℃范圍內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定；s p ．3 9 s 菌所產(chǎn)B 一葡萄糖苷酶的最適p H 、最適溫度及p H穩(wěn)定范圍均與另

5、兩株菌相同，只是溫度穩(wěn)定范圍更寬，為2 0 ℃一6 0 ℃。對(duì)s p ．4 8 s 、s p ．8 4 8 s 和s p ．3 9 s 菌所產(chǎn)的酶經(jīng)分離提純后的相應(yīng)酶蛋白，進(jìn)行S D S 一聚丙烯酰胺凝膠電泳，都得到電泳單點(diǎn)，其酶蛋白分子量分別為3 4 ，0 0 0 、3 1 ，0 0 0 和5 0 ，0 0 0 。首次考察了醬油發(fā)酵過程中大豆皂甙組成和含量的變化。一方面，由于醬油曲子中含有水解大豆皂甙糖基的酶，可以水解部分糖基，產(chǎn)生低

6、糖鏈、高活性的大豆皂甙；另一方面，大豆皂甙在醬油發(fā)酵過程中含量隨時(shí)間增加而增加，到一定時(shí)間后又下降，這一規(guī)律可以幫助人們在醬油生產(chǎn)過程中有效控制發(fā)酵時(shí)間，得到含有更多大豆皂甙的對(duì)人們健康有利的醬油產(chǎn)品。通過對(duì)醬油制曲過程中大豆皂甙的變化與大豆皂甙酶解情況的對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)大豆皂甙在制曲過程中產(chǎn)生的新皂甙與大豆皂甙酶解后產(chǎn)生的新皂甙很相似，說明大豆皂甙在制曲過程中的變化機(jī)理與酶解作用機(jī)理相同，都是在水解酶的作用下將大豆皂甙的糖基水解( 得到