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文檔簡介
1、隨著口腔種植技術的進步與創(chuàng)新,T2DM已是種植非禁忌證,但是T2DM患者的種植失敗率仍明顯高于正常患者。在臨床工作中,糖尿病患者拔牙后拔牙窩??梢姽怯喜涣?,即使植入常規(guī)骨替代材料后其骨愈合效果往往也并不理想。因此,研究適合 T2DM患者的骨替代材料具有非常重要的意義。ASCs是近些年來的研究熱點,對骨缺損修復同樣具有革命性意義,是骨組織工程中的干細胞理想來源。因此我們提出,采用ASCs構建的生物材料對T2DM狀態(tài)下的骨形成具有重要的促
2、進作用。在評價生物材料成骨效應之前,首先應當建立的是標準的CSD模型,遺憾的是如今國內外對于CSD模型的研究主要集中于正常動物模型,對于T2DM狀態(tài)下CSD的大小尚屬未知,這勢必影響評價骨修復材料在T2DM狀態(tài)下的生物活性的可信度。
基于此,本研究分為兩個部分,首先,通過構建T2DM大鼠及正常大鼠顱骨系列骨缺損模型,探索 T2DM狀態(tài)下大鼠顱骨 CSD值;其次,以殼聚糖海綿為支架,與ASCs膜片復合后植入T2DM大鼠顱骨CSD
3、模型,觀察殼聚糖海綿復合ASCs膜片對T2DM大鼠顱骨CSD模型骨愈合的促進作用。
第一部分T2DM大鼠顱骨CSD模型的實驗研究
目的:探索T2DM大鼠顱骨CSD值的大小。
方法:選擇SPF級9周齡SD大鼠,體重300-320 g,用高脂高糖飼料+小劑量STZ腹腔注射誘導T2DM大鼠模型,建模成功后,將T2DM大鼠及正常大鼠各隨機分為4組,每組3只,分別于顱骨中央區(qū)制備直徑為2、3、4、5 mm,穿透顱骨到
4、達硬腦膜的骨缺損;術后8周取材,分別行大體觀察、X線檢查及組織學染色。
結果:T2DM大鼠行顱骨缺損術后8周,直徑2 mm的顱骨缺損愈合完全,X線阻射,組織學檢測可見新骨生成良好;直徑3、4、5 mm的顱骨缺損愈合不完整,X線透射,新骨生成不足。正常大鼠直徑2、3、4 mm的缺損愈合完全,X線阻射,組織學檢測可見新骨生成良好;直徑5 mm的缺損未見愈合,X線透射,新骨生成較少。
結論:T2DM大鼠的顱骨骨缺損區(qū)愈合明
5、顯差于正常大鼠;T2DM大鼠顱骨CSD參考直徑可定義為3 mm。
第二部分殼聚糖海綿復合ASCs膜片對T2DM大鼠顱骨CSD愈合促進作用的實驗研究
目的:觀察殼聚糖復合ASCs膜片能否促進T2DM大鼠顱骨CSD的愈合。
方法:體外分離培養(yǎng)大鼠原代ASCs細胞,通過BCIP/NBT染色、天狼星紅染色、茜素紅染色觀察ASCs的成骨能力,油紅O染色觀察ASCs的成脂能力;使用冷凍干燥機制備殼聚糖海綿;誘導ASCs
6、成膜后與支架海綿復合,通過DAPI染色、SEM觀察殼聚糖海綿攜帶ASCs的能力;天狼星紅染色觀察ASCs膜片成膠原能力;并將殼聚糖復合ASCs膜片植入到T2DM大鼠顱骨CSD骨缺損區(qū),對照組僅制備缺損不移植任何材料,實驗組及對照組大鼠各5只。8周后取材,通過大體觀察、Micro CT掃描、組織學染色觀察殼聚糖復合ASCs膜片對于T2DM大鼠顱骨CSD愈合的促進情況。
結果:ASCs具有成骨、成脂多向分化能力;殼聚糖海綿能夠很好
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