丙型肝炎病毒部分非結構區(qū)蛋白B細胞表位的研究.pdf

1、丙型肝炎病毒（HCV）是導致非胃腸道傳播的肝炎的主要致病原.為單股正鏈RNA病毒,3.000多個氨基酸的前體蛋白切割后分為結構區(qū)與非結構區(qū)蛋白,HCV的非結構蛋白在病毒的復制及成熟中發(fā)揮重要的作用.如NS3的絲氨酸蛋白酶,NS5B的RNA聚合酶等,它們在體內也能引起很強的體液和細胞免疫反應.機體識別B細胞表位激發(fā)的抗體在介導病毒粒子清除,誘導有效細胞免疫應答等方面發(fā)揮作用.噬菌體展示技術已被證明為研究蛋白質與其配體相互關系很有效的工具,

2、在該實驗中,我們建立了以噬菌體展示技術為核心的研究病毒B細胞表位的平臺,實驗過程包括作為HCV非結構區(qū)蛋白抗原及特異多抗的制備,肽庫的篩選,基于噬菌體PIII蛋白結構域I-II系統(tǒng)目的肽的性質的研究.1.HCV部分非結構區(qū)蛋白抗原的制備,這部分是全部工作的前提與基礎,經過多個表達系統(tǒng)的嘗試后,三個非結構區(qū)蛋白,包括HCV NS3C/NS4（氨基酸序列1602-1811）、NS5AB（氨基酸序列2263-2497）,NS5B-dc21（氨

3、基酸序列2420-2989）得到了成功表達.HCV NS3C/NS4蛋白是以硫氧還蛋白融合表達的方式獲得的.2HCV部分非結構區(qū)蛋白B細胞表位的篩選,利用噬菌體隨機展示十二肽庫研究蛋白質的抗原表位.首先是作為篩選分子的特異多抗的制備,將純化的三種HCV非結構區(qū)蛋白耦聯Sepharose4B.3.對所獲B細胞表位的進一步研究.設計了一種新穎的方法研究篩選得到的B細胞表位的性質,我們使用的伏庫隨機肽位于噬菌體PIII蛋白的N端,利用基因工程