米非司酮對人卵巢顆粒細胞Bcl-2和Bax表達的影響.pdf

1、背景:孕酮是卵巢合成和分泌的主要激素之一，除了作為其它激素的底物，孕酮對于調(diào)節(jié)排卵和黃素化等生殖事件也是必需的。米非司酮是一種炔諾酮衍生物，與孕酮受體和糖皮質(zhì)激素受體有極強的親和力。作為抗孕酮藥物，米非司酮已被廣泛應(yīng)用于臨床終止早期妊娠。在調(diào)節(jié)生育方面，米非司酮還有其它可能的應(yīng)用，如抑制排卵、阻止植入和誘導出血。作為一種可能的避孕藥，米非司酮吸引了眾多研究者的注意。目前證實，卵泡期服用米非司酮能干擾卵泡生長，抑制排卵，這使米非司酮有可能

2、成為一種不含雌激素的抑制排卵的口服避孕藥。但其抑制排卵的確切機制并不清楚。 顆粒細胞是成熟卵泡中最大的細胞群，其包圍且營養(yǎng)著卵母細胞，支持卵母細胞成熟。另外，顆粒細胞分泌高水平甾體激素，以確保植入所必需的子宮內(nèi)膜感受態(tài)的形成及早期胚胎的發(fā)育。近來發(fā)現(xiàn)，卵巢顆粒細胞凋亡是卵泡閉鎖和黃體退化的主要原因。已證實所有脊椎動物卵巢卵泡的閉鎖是通過顆粒細胞層的凋亡介導的。這些研究提示，米非司酮有可能通過誘導顆粒細胞凋亡來抑制排卵。

3、有學者研究了米非司酮調(diào)節(jié)卵巢顆粒細胞凋亡的可能途徑，發(fā)現(xiàn)米非司酮處理顆粒細胞24h后增加了顆粒細胞Caspase-3的活性。但目前為止，未見米非司酮對卵巢顆粒細胞凋亡的影響及其對凋亡相關(guān)基因Bcl-2基因家族表達的影響。本研究擬觀察低劑量米非司酮對體外培養(yǎng)的人卵巢黃素化顆粒細胞凋亡及其Bcl-2和Bax蛋白和基因水平表達的影響，探討米非司酮影響排卵的可能機理。 材料和方法:人卵巢顆粒細胞來自經(jīng)超聲引導下取卵的體外受精-胚胎移植(

4、IVF-ET)患者。顆粒細胞體外培養(yǎng)24小時貼壁后更換新鮮培養(yǎng)基，并分別加入終濃度為0(即無米非司酮作用—基礎(chǔ)狀態(tài)，為對照組)、2.5、5和10μM/L的米非司酮繼續(xù)培養(yǎng)24小時。采用電子顯微鏡和DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察不同濃度米非司酮對顆粒細胞的形態(tài)和生化特征的影響；運用免疫細胞化學法觀察不同濃度米非司酮對顆粒細胞中Bcl-2和Bax蛋白表達的影響；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)法測定不同濃度米非司酮處理后顆粒細胞Bcl-2和B

5、ax的mRNA的表達水平。 用One-wayANOVA和Student-Newman-Keuls檢驗的統(tǒng)計學方法進行處理組與對照組及兩兩組間數(shù)據(jù)比較分析，檢驗水準α=0.05，雙側(cè)。所有實驗數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進行處理。 結(jié)果: 1.體外培養(yǎng)第一個24小時后，顆粒細胞貼壁，平鋪生長，胞質(zhì)富含顆粒，細胞間出現(xiàn)纖維鏈接。 2.不同濃度米非司酮處理顆粒細胞24h后，透射電鏡觀察顯示，米非司酮能誘導

6、顆粒細胞出現(xiàn)染色質(zhì)邊集、胞質(zhì)濃縮及細胞體積縮小等細胞凋亡所特有的形態(tài)學改變。 3.不同濃度米非司酮處理顆粒細胞24h后，DNA瓊脂糖凝膠電泳發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，米非司酮各處理組均未出現(xiàn)明顯的“梯狀條帶”。 4.免疫細胞化學結(jié)果顯示，顆粒細胞中Bcl-2蛋白表達隨米非司酮處理劑量的增加而減少，處理組與對照組相比及處理組間Bcl-2蛋白表達差異具有顯著性；相反，Bax蛋白則隨著米非司酮劑量的加大表達增多，且處理組與對照組相比

7、及處理組間Bax蛋白表達差異具有顯著性。 5.米非司酮處理組Bcl-2及Bax的mRNA表達水平與對照組相比均無顯著性差異，且各處理組間Bcl-2及Bax的mRNA表達水平也無顯著性差異。 結(jié)論: 1.米非司酮能誘導體外培養(yǎng)的人卵巢黃素化顆粒細胞發(fā)生凋亡，這可能是其通過抑制排卵發(fā)揮避孕功效的作用機制之一。 2.調(diào)節(jié)Bcl-2和Bax蛋白的表達可能是米非司酮誘導顆粒細胞凋亡的途徑之一。 3.米非司酮