冬凌草甲素對人肺腺癌SPC-A-1細胞的抑制作用及其機制研究.pdf

1、目的：研究冬凌草甲素（Oridnin）對人肺腺癌SPC-A-1細胞的抑制作用，并探討其作用機制。
　　 方法：采用MTT法（3-（4，5-Dimethylthiazol-2-y1）-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT）檢測Oridnin對SPC-A-1細胞增殖的影響；相差顯微鏡、Hoechst33258熒光染色、透射電鏡觀察細胞形態(tài)變化；流式細胞儀分析細胞周期和細胞凋亡率；TUNEL法檢測細胞

2、凋亡；分光光度法檢測Caspase-3、Caspase-9活性；Real-timeRT-PCR、Western blot檢測相關基因轉錄和蛋白表達情況。
　　 結果：MTT法檢測結果顯示Oridnin對SPC-A-1細胞具有增殖抑制作用，并具有時間和濃度依賴性；Hoechst33258熒光染色、相差顯微鏡和透射電鏡觀察證實Oridnin能使SPC-A-1細胞出現(xiàn)皺縮、細胞核邊集、空泡變性、染色質高度凝集等細胞凋亡形態(tài)學改變；流式

3、細胞術檢測結果顯示Oridnin可誘導SPC-A-1細胞凋亡，20、30、4μmo/L Oridnin作用SPC-A-1細胞48小時后細胞凋亡率分別為3.2％、12.0％、34.1％（P<0.01），并使細胞周期阻滯在G2/M期。40μmo/L Oridnin作用SPC-A-1細胞12、24、48小時后凋亡率分別為4.1％、11.4％、34.1％，表明Oridnin能使細胞發(fā)生凋亡和周期阻滯，并呈現(xiàn)濃度、時間依賴趨勢。TUNEL檢測也證

4、實Oridnin能使SPC-A-1細胞凋亡，且呈現(xiàn)濃度依賴趨勢。分光光度法檢測Caspase3、Caspase9活性，發(fā)現(xiàn)給藥后細胞Caspase-3、Caspase-9活性增加。Real-time RT-PCRZ證實在mRNA水平Lp53、Caspase-3、bax、p21基因轉錄上調，bcl-2、c-Myc基因轉錄下調，Western blot結果顯示在蛋白水平上P53、Bax、P21上調表達，Bcl-2下調表達。
　　 結