電離輻射對體外培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、背景：瘢痕疙瘩有著過度生長、侵犯鄰近組織、手術切除后極易復發(fā)、治療效果不佳等特點，成為當今醫(yī)學界面臨的一個重大難題。目前已知與成纖維細胞增殖及凋亡平衡失調關系密切，所以人們采取各種方法來抑制成纖維細胞增殖并誘導其凋亡。有些學者發(fā)現(xiàn)電子線照射配合手術切除對瘢痕疙瘩十分有效，然而由于對電子線照射的作用機理和安全系數(shù)方面未達成共識，導致治療效果也相差甚遠，因此臨床上未能廣泛應用。
　　目的：探討電離輻射對體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖

2、和凋亡方面的生物學影響。
　　方法：1.細胞培養(yǎng)：手術取4例瘢痕疙瘩（耳垂、大腿、前胸、上臂各1例，均為南京醫(yī)科大學友誼醫(yī)院手術病例，按文獻方法進行成纖維細胞原代培養(yǎng)，待細胞融合后傳代，實驗所用細胞均為4～8代處于對數(shù)生長期的瘢痕疙瘩成纖維細胞（keloid fibroblast, KF），分別定量接種于培養(yǎng)皿或96孔板中。2.電離輻射：選用6Mev電子線，采用單次大劑量（500cGy,1000cGy,1500cGy,2000cG

3、y）及不同的分割方式（常規(guī)分割：200cGy/f,5f/w;大分割：500cGy/f,3f/w）分別對瘢痕疙瘩成纖維細胞進行照射。3.細胞活性檢測：觀察細胞損傷的形態(tài)學變化；細胞計數(shù)法繪制細胞生長曲線；四甲基偶氮唑鹽比色法檢測細胞增殖活性。4.細胞周期及凋亡檢測：應用流式細胞術（flow cytometry, FCM）觀察各組細胞周期變化及凋亡百分率。
　　結果：1.單次大劑量1000cGy,1500cGy,2000cGy照射后2

4、4h、48h、72h，瘢痕疙瘩成纖維細胞出現(xiàn)增殖活性持續(xù)下降，下降程度與照射劑量成正比。2.常規(guī)分割組（200cGy/f,5f/w）與大分割組（500cGy/f,3f/w）分別照射至DT=2000cGy時，瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖活性明顯下降（P<0.05），大分割組下降更明顯（P<0.05）。3.流式細胞術檢測結果表明，電子線照射可誘導瘢痕疙瘩成纖維細胞產(chǎn)生凋亡，以1000cGy，1500cGy照射時凋亡率最大（P<0.01），隨后增加