同源結構域相互作用蛋白激酶HIPK2在宮頸癌中的表達及其功能研究.pdf

1、目的：宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一，目前其死亡率仍居世界首位。人乳頭狀瘤病毒(Human Papilloma Virus，HPV)感染是宮頸癌的主要致病原因，但細胞內(nèi)遺傳因素的改變在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展也起著重要的作用，因此需要進一步研究和尋找有臨床意義的與宮頸癌相關的基因。同源結構域相互作用的蛋白激酶2(HIPK2)具有誘導細胞凋亡，抑制細胞生長，而且與胚胎發(fā)生，腫瘤發(fā)生發(fā)展等密切相關，但與宮頸癌的關系仍未知。
　　方法：通過實時定

2、量熒光real time RT-PCR和Western blot方法檢測HIPK2mRNA和蛋白在正常宮頸、宮頸癌組織和細胞株HeLa中的表達。應用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)進行在宮頸癌組織中HPV高危亞型(16和18)的檢測。應用RNA干擾技術干擾宮頸癌細胞HeLa中HIPK2的表達，并采用real-timeRT-PCR和Western blot法檢測干擾效率。應用流式細胞儀檢測干擾前后細胞凋亡的變化，并用Western bl

3、ot法檢測凋亡相關蛋白caspase-3的表達。MTT實驗、劃痕實驗和Transwell侵襲試驗分別檢測細胞生長、細胞運動和侵襲力的改變，并用Western blot法檢測侵襲相關蛋白MMP2、MMP9的表達。
　　結果：HIPK2 mRNA在宮頸癌組織中的表達水平明顯高于正常宮頸組織(P<0.05)。HIPK2 mRNA在宮頸癌細胞中表達呈強陽性。HIPK2蛋白在宮頸癌組織中的表達水平顯著高于正常宮頸組織(P<0.05)，與re

4、al-time RT-PCR結果一致。宮頸癌組織中HPV16和HPV18陽性率為70％(14/20)。HIPK2在宮頸癌組織中的表達與HPV16和HPV18存在顯著相關性(r=0.655，P<0.05)。成功設計、合成和構建了含有HIPK2特異性siRNA的重組病毒質(zhì)粒。宮頸癌細胞HeLa轉染HIPK2 siRNA后，HIPK2 mRNA及蛋白在宮頸癌細胞HeLa中的表達特異并有效地被抑制。RNA干擾HIPK2抑制了細胞凋亡，各組細胞凋

5、亡率分別為：未轉染組(11.6±1.24)％，轉染pGCSIL-NC組(10.1±1.12)％，轉染pGCSIL-HIPK2組(6.1±1.16)％。干擾組和陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。RNA干擾HIPK2使凋亡相關蛋白caspase-3表達下調(diào)；促進細胞生長及細胞的運動能力。Transwell侵襲試驗各組細胞中穿過濾膜細胞數(shù)差異無統(tǒng)計學意義，MMP-2、MMP-9活性在各組細胞中無明顯差異。
　　結論：HI