L-組氨酸產生菌的選育及其發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、本文以谷氨酸棒桿菌AJ88為出發(fā)菌株，對L-組氨酸的發(fā)酵法生產進行了研究。主要內容及結果如下： 1.以組氨酸的茚三酮顯色和Pauly特征顯色為根據(jù)，結合紙層析法，確定利用Pauly顯色和茚三酮顯色相結合對發(fā)酵液中的L-組氨酸進行定性分析，采用點樣紙層析茚三酮顯色后洗脫再比色來定量測定發(fā)酵液中的L-組氨酸，茚三酮顯色洗脫液最佳吸收波長為510nm，最佳洗脫時間為30min，當點樣組氨酸含量在2μg～12μg范圍內時呈現(xiàn)較好的線性。

2、 2.對出發(fā)菌用DES和NTG逐級誘變處理，采用8-氮鳥嘌呤(8-AG)，2,6-二氯嘌呤(DCP)，硫唑嘌呤(SP)，2-硫尿嘧啶(2-TU)，氨基三氮唑(AMT)以及1,2,4-三唑丙氨酸(TRA)作為抗性藥物進行選育，并使菌株帶上組氨酸酶缺陷型標記，最終獲得一株能夠較多積累L-組氨酸的菌株HZ5013(TRAR，AMTR，histidase，DCPR，2-TUR)。在以葡萄糖為碳源、硫酸銨為氮源的培養(yǎng)基中發(fā)酵3d，產酸可達

3、4.63g/L，比出發(fā)菌株產酸提高了近2倍。 3.對菌株HZ5013進行了培養(yǎng)基和發(fā)酵條件的優(yōu)化。得到最佳的種子培養(yǎng)基為(g/L)：葡萄糖25，(NH4)2SO410，玉米漿25，KH2PO41.5，MgSO4·7H2O1，CaCO320，VH10μg/L；最佳發(fā)酵培養(yǎng)基為(g/L)：葡萄糖80，(NH4)2SO431，玉米漿5，KH2PO41.3，MgSO4·7H2O0.5，CaCO320，VH5μg/L；搖瓶發(fā)酵最佳培養(yǎng)條件

4、為：培養(yǎng)基初始pH7.0，接種量8％，裝液量為15mL/250mL搖瓶或20mL/500mL搖瓶，往復式搖床30±1℃培養(yǎng)，搖床轉速100次/min，發(fā)酵周期72h。優(yōu)化后最終產酸可達5.5g/L。 4.考察了添加氨基酸、有機酸、維生素、各種營養(yǎng)源等以及改變培養(yǎng)手段對L-組氨酸代謝的影響。實驗發(fā)現(xiàn)添加0.1g/LL-亮氨酸、L-異亮氨酸和L-脯氨酸時，產酸有所提高。添加其它氨基酸均使產酸有所下降。添加丙酮酸、草酸、乙酸能使產酸明