胡椒堿在體外對表皮黑素細胞生長和遷移的影響.pdf

1、背景：
　　胡椒堿是中藥黑胡椒、蓽茇等主要的單體成分，印度古方中曾有口服黑胡椒并配合其它藥物治療白癜風的記載，我院選取女貞子、黑胡椒、透骨草、浮萍、烏蕨組成非光敏組方中藥2號，其中黑胡椒、女貞子為君藥，臨床外用治療白癜風取得較好療效。國外研究發(fā)現(xiàn)黑胡椒提取物以及其單體成分胡椒堿可促進黑素瘤細胞的增殖和黑素量的合成，刺激黑素細胞的增殖和分化。國內研究表明胡椒堿可以顯著促進黑素瘤細胞黑素的合成，在試驗濃度可直接上調蘑菇酪氨酸酶的活性；

2、并可通過上調酪氨酸酶和TRP1的表達明顯促進表皮黑素細胞的黑素合成。最近有學者應用無色小鼠模型探討胡椒堿及其類似合成物在白癜風治療中的作用，研究顯示，胡椒堿及其類似合成物可以刺激小鼠均勻復色。局部外涂小鼠皮膚并聯(lián)合小劑量的UVR照射，能顯著提高色素沉著反應，美容效果較常規(guī)治療方法好。由此可見胡椒堿可影響黑素細胞的生物學活性，并作為一種治療白癜風的新的藥物有較好的應用前景。目前胡椒堿治療白癜風的機理尚不明確，且對表皮黑素細胞遷移影響的研究

3、未見報道，為進一步探討其可能的作用機理，我們研究中藥單體胡椒堿對人表皮黑素細胞生長及遷移的影響，為臨床研發(fā)安全有效的治療白癜風的新藥提供實驗依據。
　　目的：
　　研究中藥單體胡椒堿對表皮黑素細胞的增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成及黑素細胞遷移的影響。
　　方法：
　　培養(yǎng)人表皮黑素細胞以系列濃度的胡椒堿作用72小時，并以相應的溶媒作為對照，采用MTT法測定細胞增殖情況，多巴氧化法測定酪氨酸酶活性，NaOH裂解法測定

4、黑素含量。6.25ug/ml胡椒堿作用48小時后，應用細胞劃線法和微孔濾膜分析法分析中藥單體胡椒堿對人表皮黑素細胞遷移的作用。
　　結果：
　　胡椒堿在3.125ug/ml時，對黑素細胞增殖無明顯影響，與空白對照組相比無顯著性差異；濃度在6.25-12.5ug/ml時，能促進黑素細胞的增殖（P<0.05），以6.25ug/ml作用最為顯著（P<0.01）。濃度增加至25ug/ml時對黑素細胞增殖無明顯影響；當濃度提高至50u

5、g/ml以上時對黑素細胞生長有明顯影響（P<0.01），細胞生長不理想，胞體變大，折光性減弱，并于48小時內逐漸脫壁死去。在不同的時間點用6.25ug/ml的胡椒堿處理黑素細胞，研究發(fā)現(xiàn)處理24小時、48小時對黑素細胞增殖無明顯作用。處理72小時能明顯促進黑素細胞增殖，與對照組相比，有顯著性差異（P<0.05）。濃度3.125～12.5ug/ml時，胡椒堿對黑素細胞酪氨酸酶活性無影響，而增加至25ug/ml和50ug/ml時，酪氨酸酶活

6、性明顯增加，與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。胡椒堿在濃度3.125～50ug/ml對黑素合成有明顯的促進作用，且以12.5ug/ml作用最為顯著，各濃度組與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。在遷移實驗中，為了排除細胞增殖的干擾，選擇胡椒堿的作用濃度和作用時間分別為6.25ug/ml和48 h。研究表明中藥單體胡椒堿對人表皮黑素細胞無促遷移作用（P≥0.05）。
　　結論：
　　中藥單體胡椒堿可促進