糖基化骨髓間充質干細胞在骨缺損模型中靶向遷移能力的探究.pdf

1、目的：探究骨髓間充質干細胞(BM-MSCs)經過糖基化修飾后向損傷組織靶向遷移能力的改變情況；通過體外對比檢測普通BM-MSCs和糖基化的BM-MSCs在配體形成、與選擇素結合能力等方面的差異，最終在骨缺損模型中對比普通BM-MSCs與糖基化的BM-MSCs向骨缺損處的靶向遷移情況，為骨缺損的治療奠定一定的實驗理論基礎。
　　方法：首先選用1只新西蘭兔，2個月齡，體質量1.5Kg，抽提骨髓，體外分離、培養(yǎng)、擴增BM-MSCs；免疫

2、組織化學法及成骨誘導法鑒定所培養(yǎng)的細胞；一部分BM-MSCs運用脂質體法將含有α-1,3巖藻糖基轉移酶VI（FUT-6）基因的質粒（pcDNA3.1）轉染BM-MSCs（實驗組），另一部分則未轉染FUT-6基因（對照組）；通過抗性篩選試劑（G418）篩選實驗組細胞后建立穩(wěn)定表達FUT-6的BM-MSCs細胞株（FUT-6/BM-MSCs）。Elisa法檢測BM-MSCs和FUT-6/BM-MSCs的FUT-6表達量及唾液酸化路易斯寡糖（

3、sLeX）的生成量；流式細胞技術檢測BM-MSCs和FUT-6/BM-MSCs與E-選擇素、P-選擇素的結合能力；BM-MSCs和FUT-6/BM-MSCs于體外用eGFP標記；12只新西蘭兔尺骨缺損造模（缺損程度1.5～2.0cm）后分為2組（每組6只）后通過靜脈分別回輸標記細胞于兩組同質骨缺損動物模型體內，術后6、12、24h用熒光顯微鏡觀察骨缺損處髓腔組織中熒光細胞數(shù)量，評估各組熒光細胞的靶向遷移情況。
　　結果：BM-MS

4、Cs易于從骨髓液中分離提取，并能夠在體外培養(yǎng)、擴增；FUT-6/BM-MSCs可高表達FUT-6并上調sLeX結構的生成，差異具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05）；流式細胞技術檢測顯示：FUT-6/BM-MSCs相較BM-MSCs與E-選擇素結合力由15.0％提高至68.9%；與P-選擇素結合力由12.7%提高至59.7%；術后6、12、24h熒光顯微鏡觀察FUT-6/BM-MSCs均較BM-MSCs在骨缺損處髓腔組織中數(shù)量更多，差異均有統(tǒng)計