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文檔簡介
1、目的:探究骨髓間充質干細胞(BM-MSCs)經過糖基化修飾后向損傷組織靶向遷移能力的改變情況;通過體外對比檢測普通BM-MSCs和糖基化的BM-MSCs在配體形成、與選擇素結合能力等方面的差異,最終在骨缺損模型中對比普通BM-MSCs與糖基化的BM-MSCs向骨缺損處的靶向遷移情況,為骨缺損的治療奠定一定的實驗理論基礎。
方法:首先選用1只新西蘭兔,2個月齡,體質量1.5Kg,抽提骨髓,體外分離、培養(yǎng)、擴增BM-MSCs;免疫
2、組織化學法及成骨誘導法鑒定所培養(yǎng)的細胞;一部分BM-MSCs運用脂質體法將含有α-1,3巖藻糖基轉移酶VI(FUT-6)基因的質粒(pcDNA3.1)轉染BM-MSCs(實驗組),另一部分則未轉染FUT-6基因(對照組);通過抗性篩選試劑(G418)篩選實驗組細胞后建立穩(wěn)定表達FUT-6的BM-MSCs細胞株(FUT-6/BM-MSCs)。Elisa法檢測BM-MSCs和FUT-6/BM-MSCs的FUT-6表達量及唾液酸化路易斯寡糖(
3、sLeX)的生成量;流式細胞技術檢測BM-MSCs和FUT-6/BM-MSCs與E-選擇素、P-選擇素的結合能力;BM-MSCs和FUT-6/BM-MSCs于體外用eGFP標記;12只新西蘭兔尺骨缺損造模(缺損程度1.5~2.0cm)后分為2組(每組6只)后通過靜脈分別回輸標記細胞于兩組同質骨缺損動物模型體內,術后6、12、24h用熒光顯微鏡觀察骨缺損處髓腔組織中熒光細胞數(shù)量,評估各組熒光細胞的靶向遷移情況。
結果:BM-MS
4、Cs易于從骨髓液中分離提取,并能夠在體外培養(yǎng)、擴增;FUT-6/BM-MSCs可高表達FUT-6并上調sLeX結構的生成,差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05);流式細胞技術檢測顯示:FUT-6/BM-MSCs相較BM-MSCs與E-選擇素結合力由15.0%提高至68.9%;與P-選擇素結合力由12.7%提高至59.7%;術后6、12、24h熒光顯微鏡觀察FUT-6/BM-MSCs均較BM-MSCs在骨缺損處髓腔組織中數(shù)量更多,差異均有統(tǒng)計
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