兔角膜板層移植去端肽豬皮Ⅰ型膠原的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 1.研制一種擁有良好光學(xué)透明度、角膜曲率與一定力學(xué)強度的角膜移植替代物,并評價其性能。
　　 2.觀察去端肽豬皮Ⅰ型膠原行板層角膜移植術(shù)后的角膜愈合情況,并分析相關(guān)影響因素。
　　 3.探討去端肽豬皮Ⅰ型膠原作為角膜移植替代物的可行性,為進(jìn)一步研制更成熟的角膜移植替代材料提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 中國純種大耳白兔100只,從中隨機選取80只兔(80眼)為實驗組,根據(jù)角膜移植

2、植片的來源不同將實驗組隨機分為膠原材料實驗組(A組,40眼)及同種異體對照組(B組,40眼),兩組均行單眼的前板層角膜移植術(shù)。余20只兔(40眼)作為B組角膜移植供體來源,實驗組80只兔未手術(shù)眼作為空白對照組(N組)。各組術(shù)后每天行大體、裂隙燈觀察,4周后每月觀察一次,觀察角膜愈合情況,角膜是否透明、植片是否脫落、有無新生血管長入,并按評分標(biāo)準(zhǔn)記錄評分。A、B組于術(shù)后3天、14天、1個月、3個月和6個月處死動物,每時間點8只(8眼),取

3、兔角膜行組織病理學(xué)觀察,觀察角膜上皮層及基質(zhì)層的修復(fù)情況；免疫組織化學(xué)染色檢測上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白K3抗體AE5的表達(dá),以鑒定角膜上皮的愈合情況。
　　 結(jié)果
　　 1.去端肽豬皮Ⅰ型膠原性能:膠原材料的白光透過率可達(dá)91±2％,折光指數(shù)1.3520±0.0002,接近人角膜基質(zhì)折光指數(shù)(1.373-1.380),抗張強度285±14KPa,彈性模量為1.7±0.2MPa,斷裂伸長率16±3％,擁有一個良好的光學(xué)性能與角膜曲

4、率,有一定的抗張強度。
　　 2.大體觀察:術(shù)后A、B兩組板層移植術(shù)后角膜透明度評分均逐漸降低,即角膜的透明度逐漸升高,術(shù)后6個月透明度最高。A組在3天、7天及14天角膜透明度評分較B組差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),說明在移植術(shù)后仞期膠原材料相對于同種異體植片可能不能使角膜達(dá)到一個良好的透明度；術(shù)后1月、3月及6月時間點A組與B組角膜透明度比較,差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),說明膠原材料與同種異體植片在術(shù)后角膜透明度恢復(fù)

5、上可能達(dá)到同樣的效果。A、B兩組術(shù)后角膜新生血管評分逐漸升高,術(shù)后14天最高,后B組逐漸減輕,但A組變化緩慢,術(shù)后1個月新生血管程度逐漸減輕。6個月時,兩組對角膜新生血管的影響可能不同,A組術(shù)后后期角膜新生血管可能不能完全消失。
　　 3.組織病理學(xué):A組術(shù)后3天,角膜中央均勻紅染的膠原物質(zhì)覆蓋表面,邊緣可見上皮細(xì)胞向其表面爬行；術(shù)后1月,上皮基本修復(fù),無明顯的膠原材料；術(shù)后6月,角膜上皮表面光滑,上皮細(xì)胞排列規(guī)則,淺基質(zhì)層膠原

6、纖維排列艦則,部分角膜存在小的膠原紊亂區(qū)域。B組術(shù)后3天,角膜上皮基本完整,局部偶有小的缺損；術(shù)后1月,角膜上皮基本修復(fù)；術(shù)后6月,角膜上皮修復(fù),基質(zhì)層中膠原排列規(guī)則,局部有小的膠原紊亂區(qū)域。
　　 4.免疫組織化學(xué):A、B組術(shù)后角膜上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白K3抗體AE5呈陽性表達(dá),表明角膜上皮修復(fù)細(xì)胞為上皮細(xì)胞。
　　 結(jié)論
　　 1.膠原材料具有良好透明度、角膜曲率與一定力學(xué)強度,力學(xué)性能需進(jìn)一步加強。