鵝BMP4基因克隆及其對顆粒細胞凋亡的抑制作用研究.pdf

1、BMP4是BMPs蛋白家族中的一員，對卵泡顆粒細胞與膜細胞類固醇激素的分泌以及顆粒細胞分化有著調(diào)節(jié)作用，并且在有些物種上對顆粒細胞的增殖或凋亡也產(chǎn)生影響。而顆粒細胞的增殖與凋亡對卵泡發(fā)育來說至關(guān)重要。因此，本試驗擬探究BMP4對鵝等級前卵泡顆粒細胞增殖或凋亡的影響。通過基因克隆獲得鵝的BMP4基因完整CDS區(qū)序列，并采用實時熒光定量技術(shù)檢測其在不同發(fā)育階段卵泡的顆粒細胞與膜細胞中的相對表達量。通過構(gòu)建其真核表達載體pEGFP-N1-BM

2、P4，使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法對顆粒細胞進行轉(zhuǎn)染來探究BMP4對鵝顆粒細胞增殖與凋亡的影響。取得的主要研究結(jié)果如下:
　　(1)鵝BMP4基因CDS區(qū)序列全長為1212bp，其核苷酸序列與斑胸草雀的同源性高達96.3％，編碼的氨基酸序列同源性為98.3％。
　　(2)鵝BMP4基因mRNA在顆粒細胞中的相對表達量均高于其在相同卵泡發(fā)育階段的膜細胞中的表達量（卵泡直徑為6～8mm的發(fā)育階段除外）。BMP基因mRNA在小卵泡顆粒細胞中表

3、達量較低，隨后表達量逐漸上升，于直徑8～10mm的卵泡及F5中表達量達到最高，隨后又開始迅速下降。膜細胞BMP4基因mRNA表達量在直徑6～8mm的卵泡中最高，且這一卵泡發(fā)育階段中BMP4基因mRNA在膜細胞表達量要高于顆粒細胞，而在卵泡其他發(fā)育階段中膜細胞BMP4 mRNA表達量均低于顆粒細胞。
　　(3)顆粒細胞轉(zhuǎn)染36h后，BMP4轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染組OD值顯著高于對照組(P＜0.05)，其他組無顯著性差異。說明在轉(zhuǎn)染BMP4基因36