聯(lián)合端粒酶反義hTR和反義hTERT對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用.pdf

1、目的：探討端粒酶RNA反義核酸(反義hTR)和端粒酶催化亞單位反義核酸(反義hTERT)分別作用以及聯(lián)合作用于宮頸癌Hela細(xì)胞，對(duì)Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用及作用機(jī)理。 方法：實(shí)驗(yàn)分空白對(duì)照、脂質(zhì)體對(duì)照、正義hTR、正義hTERT、反義hTR、反義hTERT及反義hTR+反義hTERT組。分別采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法、端粒重復(fù)序列擴(kuò)增(TRAP)-逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法和端

2、粒重復(fù)序列擴(kuò)增(TRAP)-逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)法、吖啶橙染色法、流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)端粒酶反義hTR和反義hTERT分別作用及聯(lián)合作用宮頸癌Hela細(xì)胞后，細(xì)胞的體外增殖、端粒酶活性、細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的改變。 結(jié)果：宮頸癌Hela細(xì)胞轉(zhuǎn)染端粒酶反義核酸后，出現(xiàn)明顯的細(xì)胞增殖抑制、端粒酶活性下降、細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變、凋亡率增高及細(xì)胞周期阻滯，與空白對(duì)照組、脂質(zhì)體對(duì)照組及正義

3、核酸組比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異(P＜0.01)，但反義hTR組和反義hTERT組之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。反義核酸組細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變。Hela細(xì)胞轉(zhuǎn)染0.2μmol/L反義hTR+反義hTERT3d后，細(xì)胞增殖抑制率、相對(duì)端粒酶活性、細(xì)胞凋亡率分別為69.3％、19.6％、28.6％，與反義hTR組和反義hTERT組比較(細(xì)胞增殖抑制率、相對(duì)端粒酶活性、細(xì)胞凋亡率分另為hTR：53.8％、37.3％、13.2％；h

4、TERT：56.5％、33.3％、13.7％)，有顯著性差異(P＜0.01)(Q值分別為0.867、0.919、1.075)。反義hTR+反義hTERT組比反義hTR組和反義hTERT組細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變更明顯，反義hTR+反義hTERT組G0/G1期細(xì)胞比例增加(G1期細(xì)胞比例為57.8％，空白對(duì)照組G1期細(xì)胞比例為50.7％)。 結(jié)論：端粒酶反義hTR和反義hTERT能特異性抑制宮頸癌Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)；反義hTR和反義h