金龜子綠僵菌發(fā)酵液成分分析及苦馬豆素的初步分離.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)金龜子綠僵菌進(jìn)行傳代培養(yǎng)以及液態(tài)發(fā)酵，獲得含有金龜子綠僵菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的發(fā)酵液，并對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行成分分析，初步確定發(fā)酵液的主要物質(zhì)組成成分。在此基礎(chǔ)上，根據(jù)組成成分的各自特點(diǎn)，旨在采取離心、分離、萃取、純化等措施從金龜子綠僵菌中分離得到苦馬豆素(swainsonine,SW)，為新型抗腫瘤輔助藥物SW的獲得提供清晰的分離思路。 方法：(1)采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)對(duì)金龜子綠僵菌定期進(jìn)行傳代培養(yǎng)，4℃保存：采

2、用改良查氏培養(yǎng)液對(duì)金龜子綠僵菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，收集發(fā)酵液；(2)參照植物成分分析的方法對(duì)金龜子綠僵菌發(fā)酵液的組成成分進(jìn)行分析；(3)首先采用高速離心、微孔濾過(guò)、樹(shù)脂吸附等方法對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行預(yù)處理，再運(yùn)用薄層層析檢測(cè)技術(shù)和紫外分光光度法對(duì)目標(biāo)成分SW進(jìn)行檢測(cè)，然后，在強(qiáng)堿性條件下用正丁醇反復(fù)萃取、負(fù)壓層析分離、減壓升華等方法對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行分離提??；(4)采用氣相色譜對(duì)升華產(chǎn)物中目標(biāo)成分SW進(jìn)一步確認(rèn)。 結(jié)果：(1)在25-26℃，濕度4

3、5～55％，pH值為6.5～7.0，養(yǎng)分充足的條件下，金龜子綠僵菌生長(zhǎng)良好；(2)金龜子綠僵菌發(fā)酵液中主要成分包括：生物堿(SW)、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、酚類(lèi)、油脂、揮發(fā)油、萜類(lèi)、甾體，糖類(lèi)和無(wú)機(jī)鹽，其中生物堿的特征顯色反應(yīng)最為明顯；(3)薄層層析和紫外分光光度法檢測(cè)顯示，升華產(chǎn)物中含有與苦馬豆素對(duì)照品基本一致的特征顯色反應(yīng)和紫外吸收曲線的成分；(4)采用氣相色譜法對(duì)升華產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示其出峰時(shí)間、峰形均與SW對(duì)照品接近。