轉染Cx43cDNA對腦膠質瘤C6細胞侵襲性影響的體外研究.pdf

1、研究背景：
　　 神經膠質瘤是中樞神經系統最常見的原發(fā)腫瘤。其侵襲性行為是惡性膠質瘤最重要的標志之一，使其預后不良，術后易復發(fā)。因此，膠質瘤侵襲性研究成為熱點。腫瘤細胞侵入正常組織是一個多因素參與的過程，主要包括三個環(huán)節(jié)：粘附、ECM降解及遷移。MMPs降解ECM，為膠質瘤侵襲提供空間。Cx43在中樞神經系統表達最為豐富，且主要分布在星形膠質細胞中；在惡性膠質瘤中心，Cx43低表達，而在腫塊邊緣Cx43高表達。研究表明，RNA干

2、擾抑制Cx43表達能抑制肝癌細胞侵襲，但Cx43與鼠腦膠質瘤C6細胞侵襲之間的關系尚不明確。因此，本實驗通過脂質體介導C6過表達Cx43，探討其與C6細胞侵襲性的關系及可能的機制，為臨床防治腦膠質瘤提供新的思路和策略。
　　 目的：
　　 將pCMV-Cx43cDNA重組質粒轉染入鼠腦膠質瘤C6細胞，上調C6細胞Cx43表達。探討過表達Cx43對腦膠質瘤侵襲性的影響及機制。
　　 方法：
　　 1、通過脂

3、質體將pCMV-Cx43cDNA重組質粒轉染入C6細胞，使C6細胞過表達Cx43，并用G418抗性篩選出穩(wěn)定過表達Cx43的C6細胞。
　　 2、用Western blot及RT-PCR分別檢測Cx43蛋白及Cx43mRNA表達。
　　 3、建立體外Transwell侵襲模型聯合MTT法，觀察Cx43對C6細胞侵襲能力的影響。
　　 4、用明膠酶譜法檢測細胞培養(yǎng)液中MMP-2、MMP-9活性的強弱。
　　

4、 5、Western blot檢測MMP-9蛋白表達。
　　 結果：
　　 1、成功將pCMV-Cx43cDNA重組質粒轉入C6細胞，并用G418篩選得到穩(wěn)定轉染Cx43基因的細胞株(C6-Cx43細胞)及轉染空載體的細胞株(C6-non細胞)。
　　 2、RT-PCR：C6細胞、C6-Cx43細胞及C6-non細胞Cx43mRNA相對表達量分別為：1.15±0.05、1.86±0.07、1.08±0.05，C6

5、-Cx43細胞比C6及C6-non細胞Cx43mRNA表達量明顯增加，差異有統計學意義(P<0.05)；Western blot：C6細胞、C6-Cx43細胞及C6-non細胞Cx43蛋白相對表達量分別為：0.36±0.06、1.25±0.1、0.31±0.07，C6-Cx43細胞比C6及C6-non細胞Cx43蛋白表達量明顯增加，差異有統計學意義(P<0.05)。
　　 3、各組細胞侵襲能力檢測結果顯示C6-Cx43細胞吸光度

6、值較C6-non、C6細胞組顯著增加，差異有統計學意義(P<0.05)，提示C6-Cx43細胞的侵襲能力較C6-non、C6細胞明顯增強。
　　 4、明膠酶譜法顯示，C6-Cx43細胞培養(yǎng)液中MMP-9活性明顯增強，與C6-non、C6細胞比較，差異有統計學意義(P<0.01)。
　　 5、Western blot：C6細胞、C6-Cx43細胞及C6-non細胞MMP-9蛋白相對表達量分別為0.29±0.03、0.43±

7、0.02、0.27±0.01，C6-Cx43細胞比C6、C6-non細胞MMP-9蛋白表達量明顯增加，差異有統計學意義(P<0.05)。
　　 結論：
　　 1、C6細胞成功轉染重組質粒pCMV-Cx43cDNA，C6-Cx43細胞Cx43mRNA及Cx43蛋白表達明顯增加，C6-Cx43細胞侵襲能力明顯增強。
　　 2、C6細胞過表達Cx43后細胞侵襲能力增強，可能與MMP-9活性增強、MMP-9蛋白表達上調有